植物總RNA快速提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：26125

產(chǎn)品規(guī)格：20T/50T

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒采用的方法改變傳統(tǒng)一次性裂解的作法,，對材料連續(xù)進(jìn)行兩次裂解,，并確保RNA不被降解，有效地解離核蛋白與核酸的復(fù)合物,。使用本試劑盒能在2h內(nèi)完成RNA的提取工作,，并得到質(zhì)量較高的產(chǎn)品,，通過瓊脂糖凝膠電泳可以直觀地看到,，條帶清晰,，不拖尾。

本試劑盒可從植物組織(農(nóng)作物,、水果,、花草)中，快速提取總RNA,，可同時(shí)處理大量不同樣品,。提取的總RNA純度高，基本沒有基因組,、蛋白和其它雜質(zhì)的污染,，可用于RT-PCR、Real Time RT- PCR,、芯片分析,、Northern Blot、Dot Blot,、PolyA篩選,、體外翻譯、RNase保護(hù)分析和分子克隆等多種下游實(shí)驗(yàn),。

產(chǎn)品組成：

本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影響使用效果,。

儲存事項(xiàng)：

1. 不合適的儲存于低溫(4℃或者-20℃) 會造成溶液沉淀， 影響使用效果,，因此運(yùn) 輸和儲存均在室溫下(15-25℃)進(jìn)行,。

2. 避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化,、PH值變化,，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

預(yù)防RNase污染：

1. 經(jīng)常更換新手套,。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌,，可能導(dǎo)致RNase污染。

2. 使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染,。

3. RNA在裂解液SL中時(shí)不會被RNase降解,。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。

4. 配制溶液應(yīng)使用RNase-Free ddH₂O,。(將水加入到干凈的玻璃瓶中,，加入DEPC至終濃度0.1%(VNV)，混勻后放置過夜,，高壓滅菌,。)

操作步驟 (僅供參考) ：

注：所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品，操作過程要小心,，帶口罩,、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。

1. 取試驗(yàn)材料放入研缽加入液氮快速研磨成粉末狀,，分裝于1.5ml新的無RNase離心管中,，每管約加材料50-100mg。

2. 迅速加入600μl RNA裂解液Ⅰ,。

3. 渦旋震蕩混勻后再加入200μl分離液和200μl去蛋白液,，振蕩至混勻。

4. 冰上平放靜置5min,，4℃ 12000r/min離心10min,。

5. 取約700μl上清液轉(zhuǎn)入新的無RNase離心管后加入500μl RNA裂解液Ⅱ,。

6. 振蕩混勻后冰上平放靜置5min，4℃ 12000r/min離心5min,。

7. 取約700μl上清液轉(zhuǎn)入新的無RNase離心管,，加350μl緩沖液，搖晃混勻,，再加入350μL去蛋白液,，震蕩混勻。

8. 4℃ 12000r/min離心10min,。

9. 取約700μl上清液轉(zhuǎn)入新的無RNase離心管并加入等體積的提取液,，溫和混勻后室溫放置10min。

10. 4 ℃ 12000r/min離心10min,，小心倒掉上清,。

11. 加入500μl洗滌液，4℃ 12000r/min離心1min,。

12. 小心倒掉上清,，風(fēng)干殘留液體，加入30~50μl RNase-Free ddH2O溶解沉淀,。

13. 得到RNA溶液并于-70 ℃保存,。

RNA得率：

RNA純度及濃度檢測：

完整性: RNA可用普通瓊脂糖凝膠電泳由于細(xì)胞中70-80%的RNA為rRNA，電泳后UV下應(yīng)能看到非常明顯的rRNA條帶,。rRNA大小分別約為5kb和2kb,分別相當(dāng)于28S和18S rRNA,；植物RNA樣品中最大rRNA亮度應(yīng)為次大rRNA亮度的1.5-2.0倍，否則表示RNA樣品的降解,。出現(xiàn)彌散片狀或條帶消失表明樣品嚴(yán)重降解,。

純度:  OD₂₆₀/OD₂₈₀比值是衡量蛋白質(zhì)污染程度的指標(biāo)。高質(zhì)量的RNA,，OD₂₆₀/OD₂₈₀讀數(shù)在1.8-2.1之間,，比值為2.0是高質(zhì)量RNA的標(biāo)志。OD₂₆₀/OD₂₈₀讀數(shù)受測定所用溶液的pH值影響,。同一個(gè)RNA樣品,，假定在10mM Tris，pH7 .5溶液中測出的OD₂₆₀/OD₂₈₀讀數(shù)1.8-2.1之間,，在水溶液中所測讀數(shù)則可能在1.5-1.9之間,，但這并不表示RNA不純。

濃度: 取一定量的RNA提取物,，用RNase-Free ddH₂O稀釋n倍,，用RNase-FreeddH₂O將分光光度計(jì)調(diào)零，取稀釋液進(jìn)行OD₂₆₀，OD₂₈₀測定,，按照以下公式進(jìn)行RNA濃度的計(jì)算,。
           終濃度(ng/μl) = (OD₂₆₀)× (稀釋倍數(shù)n)×40

注意事項(xiàng)：

1. 所有的離心步驟均在4攝氏度下進(jìn)行，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000 rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī),，如Eppendorf 5415C或者類似離心機(jī),。

2. 需要自備研缽。

3. 裂解液Ⅰ和去蛋白液中含有刺激性化合物,，操作時(shí)戴乳膠手套,，避免沾染皮膚,，眼睛和衣服,。若沾染皮膚、眼睛時(shí),，要用大量清水或者生理鹽水沖洗,。

4. 關(guān)于DNA的微量殘留：
一般說來任何總RNA提取試劑在提取過程中無法wan全避免DNA的微量殘留 (DNase消化也無法做到10%無殘留)，本公司的 RNA提取產(chǎn)品,，由于采取了本公司du特的緩沖體系和基因組DNA清除技術(shù),，絕大多數(shù)DNA已經(jīng)被清除，不需要DNase消化,，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR和熒光定量PCR,。個(gè)別特殊情況如DNA含量過于豐富造成殘留或者要進(jìn)行嚴(yán)格的mRNA表達(dá)量分析熒光定量PCR，我們建議在進(jìn)行模板和引物的選擇時(shí):
1)選用跨內(nèi)含子的引物,，以穿過mRNA中的連接區(qū),，這樣DNA就不能作為模板參與擴(kuò)增反應(yīng)。
2)選擇基因組DNA和cDNA上擴(kuò)增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對,。