分子生物試劑: tiangen Beyotime selleck EZBioscience國內(nèi)授權(quán)代理 celetrix addexbio adamas nano Tosoh Megazyme Advanced ImmunoChemical代理 ADS Biotec Ademtech inalco abpcorp abm abitec abgent abclonal abbott abberior AbboMax A-M systems Biocheck cusabio MCE MatTek ICl ProFoldin BioGrammatics aobious USP Proteintech QuaCell phadebas Parkell Omega NSJ Bioreagents Nof America ChromoTek Bioind bachem Apexbio Teknova ozbiosciences代理 pnabio Sage Science rPeptide Medical isotopes StemRD scripps SantaCruz Lifecore Genway Click chemistry tools Advanced Biotech AB vector QuickZyme Innovative Research of America Incell Formedium fapas zyagen nanohelix lucerna Innovative Cell Technologies Encapsula NanoSciences dianova alstem abbexa Worthington Viagen trilink panbio NIBSC matreya Enquirebio AGL Cell Guidance Systems ScienCell lucigen listlabs EpiCypher MicroGem RAN Biotech emfret Echelon Cape Cod aves labs aqix appexbio Pel-Freez PBL MRC-Holland mclab Merck CDN Isotopes Abways biotium leebio InGex Chromsystems Hellbio goldbio bioflux agrisera代理 agdia Advanced ImmunoChemical ABT beads beckman Creative PEGWorks Equitech genovis Horizon Kerafast mirus Maxim Biomedical invivogen Brainbits sero Engibody Biosearch Assaypro Advanced Cell Diagnostic Norgen NeuroMab E＆K Scientific國內(nèi)授權(quán)代理 Spherotech Eastcoast Aviva NEB Affinity Biologicals zeptometrix Coriell Lsbio zymo toyobo abcam VMRD Nist國內(nèi)授權(quán)代理 Greatcell solar Enzo Biolegend Cygnus Bethyl JPT 分子生物試劑代購 seracare國內(nèi)授權(quán)代理 Lifesensors kapa國內(nèi)授權(quán)代理 Sigma代理 SSI Diagnostica國內(nèi)授權(quán)代理 G-biosciences國內(nèi)授權(quán)代理 Fisher北京代理 Moltox國內(nèi)授權(quán)代理 Vector Badrilla Bangs labs Expression system Chromogenix nano Composix BioChain國內(nèi)授權(quán)代理 Agrisera Bioclone Cellscript Cyagen Chrono-log Epigentek Biorad Applied Biosystems Fitzgerald vwr Tocris Phyto GeneTex E＆K Scientific Eylabs Diazyme Cell Biolabs SP scienceware Signalchem Lexogen BioXcell AB Biolabs ImmunoVision GlycoTech Fisher Agar Scientific Abbiotec Anatrance Thermo賽默飛 Takara Smobio HyPhen Biomed Axis-Shield Altogen Agilent安捷倫 Advansta Mybiosource Fortebio Biomerieux EMS Bioivt Usbio Advanced BioMatrix Toxin

化學(xué)品: Omicron IsoSciences Chem service polysciences caisson PurePEG Berry＆Associates Ricca 國內(nèi)授權(quán)代理 OlChemIm apollo mekoo TRC化學(xué)品授權(quán)代理 Berry Associates Cayman medkoo

國內(nèi)授權(quán)代理

ELISA 抗體如何選擇?

時間：2023/8/29閱讀：693

在ELISA 實(shí)驗(yàn)過程中,，抗原和抗體的質(zhì)量是實(shí)驗(yàn)是否成功的關(guān)鍵因素,。要求所用抗原純度高，抗體效價高,、親和力強(qiáng).

抗單克隆或多克隆抗體都可以用作夾心ELISA系統(tǒng)中的捕獲和檢測抗體,。單克隆抗體對單個表位具有固有的特異性，可以對抗原的微小差異進(jìn)行精細(xì)檢測和定量,。多克隆抗體通常用作捕獲抗體,，然后，在夾心ELISA檢測中將單克隆抗體用作檢測抗體,，以提供更高的特異性,。除了使用傳統(tǒng)的單克隆抗體外，重組單克隆抗體也可用于ELISA,。例如,，免重組抗體衍生自產(chǎn)生抗體的細(xì)胞系，該細(xì)胞系經(jīng)過改造可表達(dá)特定的抗體重鏈和輕鏈DNA序列,。與衍生自雜交瘤的傳統(tǒng)單克隆抗體相比,，重組抗體不易受細(xì)胞系漂移或批次間差異的影響，因此可實(shí)現(xiàn)峰值抗原特異性,。

選擇抗體的另一個設(shè)計(jì)考慮因素是成本,。生產(chǎn)多克隆抗體通常比單克隆抗體便宜(約5倍)。必須權(quán)衡通過將單克隆抗體同時用于捕獲和檢測抗體獲得的特異性與生產(chǎn)兩種單克隆抗體所需的成本和時間的權(quán)衡,。另外,，準(zhǔn)備“自夾心" ELISA分析(使用相同的抗體進(jìn)行捕獲和檢測)可能會限制最終ELISA的動態(tài)范圍和靈敏度。

1) 重組免單克隆抗體: 抗體源自可生成免單克隆抗體的細(xì)胞系,，并通過分離及克隆特定抗體的重鏈和輕鏈 DNA 序列而產(chǎn)生,。ABfinity 單克隆抗體產(chǎn)自克隆文庫分離出的單一克隆。

優(yōu)勢: a.具有兔單抗的高特異性和高靈敏性

b.重組生產(chǎn),，批次間穩(wěn)定一致

c.只結(jié)合單個表位的單克隆抗體

d.無動物源生產(chǎn)

e.儲存 DNA 庫而非細(xì)胞庫

注意事項(xiàng): a.無多表位結(jié)合

2) 重組兔寡克隆抗體:

優(yōu)勢: a.具有免抗體的高特異性和高靈敏性

b.重組生產(chǎn),，批次間穩(wěn)定一致

c.通過DNA文庫表達(dá)生產(chǎn)的多表位結(jié)合位點(diǎn)

d.無動物源

e.儲存DNA庫而非細(xì)胞庫

注意事項(xiàng):a無單表位結(jié)合b.由于多表位結(jié)合，可能觀察到更多交叉反應(yīng)性

3) 噬菌體展示重組單克隆抗體:

噬體展示重組單克隆抗體,，經(jīng)由編碼抗體可變區(qū)的 DNA 序列跟編碼包膜蛋白的噬菌體基因融合后表達(dá),。因此，噬菌體包膜在其表面表達(dá)抗體融合蛋白

優(yōu)勢: a重組生產(chǎn)帶來的批次間一致性b,，單表位結(jié)合c.無動物源生產(chǎn)d.儲存 DNA庫而非細(xì)胞庫

注意事項(xiàng): 噬菌體展示抗體相比動物源抗體可能親和性更低b.噬菌體展示抗體缺少糖基化c.無多表位結(jié)合

4)單克隆抗體:

單克隆抗體源自雜交瘤細(xì)胞,。它們的生產(chǎn)包括接種動物(經(jīng)常用的是小鼠),，分離其脾細(xì)胞，然后同親本細(xì)胞融合,。所得雜交瘤細(xì)胞經(jīng)過表征后篩選克隆用于抗體生產(chǎn)

優(yōu)勢:

單克隆雜交瘤細(xì)胞系生產(chǎn),，批次間穩(wěn)定一致

b，單表位結(jié)合

注意事項(xiàng):

a隨著時間推移單克隆抗體會呈現(xiàn)細(xì)胞漂移b.無多表位結(jié)合c.需要考慮單克隆抗體的同型特異性

5) 免單克隆抗體: 兔單克隆抗體源自雜交瘤細(xì)胞,。它們的生產(chǎn)包括接種兔,，分離其脾細(xì)胞，然后同親本細(xì)胞融合,。所得雜交瘤細(xì)胞經(jīng)過表征后篩選克隆用于抗體生產(chǎn)

優(yōu)勢:

具有兔全部天然抗體庫帶來的高特異性

b.單表位結(jié)合

c.兔中的單個同種型

注意事項(xiàng):

隨著時間推移,，兔雜交瘤比小鼠雜交瘤更快呈現(xiàn)細(xì)胞漂移 (cell-line drift)b.無多表位結(jié)合

6)多克隆抗體:

多克隆抗體源自動物免疫產(chǎn)生的 B 細(xì)胞?？贵w從動物血清純化,，包括結(jié)合抗原上不同表位的多種抗體。

優(yōu)勢;

a多表位結(jié)合

b.使用全部天然抗體庫帶來的高特異性

注意事項(xiàng):

a每次動物免疫會造成批次間差異性 b.無單表位結(jié)合由于多表位結(jié)合,，更有可能觀察到交叉反應(yīng)性

二抗:

二抗是指用于靶向結(jié)合一抗的抗體,。再多種免疫印跡、ELISA以及免疫熒光等免疫實(shí)驗(yàn)中,，二抗經(jīng)常和一抗結(jié)合使用以檢測目標(biāo)蛋白,。很多二抗都帶有標(biāo)記物，例如Alexa Fluor熒光染料或辣根過氧化物酶（HRP）,從而使二抗的信號可以被檢測到,。

實(shí)驗(yàn)中也可以使用帶有標(biāo)記物的一抗,，但是二抗有很多優(yōu)點(diǎn)。無論是使用哪種一抗進(jìn)行檢測,，使用二抗可便于更換不同的標(biāo)記物,。例如，同樣的一抗可以與HRP標(biāo)記二抗一起用于免疫印跡,，也可以與另一種Alexa Fluor 488英光標(biāo)記二抗一起用于免疫熒光實(shí)

驗(yàn)

另外,，二抗結(jié)合在抗原位置的標(biāo)記染料比直標(biāo)一抗要多，從而增強(qiáng)檢測信號,。使用二抗可以避免對一抗進(jìn)行復(fù)雜且昂貴的化學(xué)標(biāo)記(偶聯(lián)),，而且偶聯(lián)反應(yīng) (具有氨基酸特異性)可能干擾一抗對抗原的識別。

選擇最佳的二抗要考慮以下因素: a.種屬來源和種屬反應(yīng)性 b.特異性反應(yīng)c.純化方法d.交叉吸附e.多重檢測能力f,，抗體類型和亞型g.完整抗體還是抗體片段h.標(biāo)記物i.生物素結(jié)合蛋白

抗體對:

由于抗體的選擇對實(shí)驗(yàn)的影響比較大，所以我們建議選擇配對的抗體進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn),，配對抗體指的是可以同時結(jié)合在一個抗原分子上的兩個抗體,。配對抗體，一般應(yīng)用于夾心ELISA實(shí)驗(yàn),。配對抗體的制備與篩選過程復(fù)雜,，即使兩個抗體針對的是不同的抗原決定簇,，也并不意味著這兩個抗體分子一定可以同時與抗原分子結(jié)合。當(dāng)一個抗體與抗原結(jié)合后,，有可能會導(dǎo)致其他結(jié)合位點(diǎn)(抗原決定族)構(gòu)型的改變,，從而導(dǎo)致其他的抗體無法正常結(jié)合到抗原上。位阻效應(yīng)的存在,，也可能使兩個結(jié)合位點(diǎn)距離較近的抗本無法同時結(jié)合在抗原上,。因此想要得到可以同時結(jié)合在抗原分子上的配對抗體，在制備出抗體后,，還需要對得到的抗體進(jìn)行篩選,。因此我們建議選擇制備與篩選好的，已經(jīng)過測試的匹配抗體對產(chǎn)品進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn),，確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,。

品牌Thermo Fisher

ELISA抗體對產(chǎn)品

名稱 IL-6 Human Matched Antibody Pair 貨號 CHC1263 10X96 T

名稱IL-4 Human Matched Antibody Pair 貨號CHC1283 10X96 T

名稱IL-8 Human Matched Antibody Pair 貨號CHC1303 10X96 T

名稱IL-2 Human Matched Antibody Pair貨號CHC1243 10X96 T

名稱IL-10 Human Matched Antibody Pair貨號CHC1323 10X96 T

名稱IL-12 p70 Human Matched Antibody Pair貨號CHC1563 10X96 T

名稱IL-1 beta Human Matched Antibody Pair貨號CHC1213 10X96 T

名稱MMP3 Human Matched Antibody Pair貨號CHC1543 10X96 T

名稱IL1RA Human Matched Antibody Pair 貨號CHC1183 10X96 T

名稱CXCL10 Human Matched Antibody Pair 貨號CHC2363 10X96 T

大鼠

名稱IL -6 Rat Matched Antibody Pair 貨號CRC0063 10X96 T

名稱IL-4 Rat Matched Antibody Pair 貨號BMS628MST 10X96 T

小鼠

名稱IP-10/CXCL10 Mouse Matched Antibody Pair 貨號BMS6018MST 10X96T

名稱IL-13 Mouse Matched Antibody Pair 貨號CMC2223 10X96 T

豬

名稱IL10 Porcine Matched Antibody Pail 貨號CSC0103 10X96 T

名稱IL-2 Porcine Matched Antibody Pair 貨號CSC1243 10X96 T

猴

名稱ICAM-1(Soluble) Monkey Matched Antibody Pair貨號BMS648MST 10X96T

名稱TNF alpha Monkey Matched Antibody Pair 貨號BMS654MST 10X96 T

雞

名稱IFN gamma Chicken Matched Antibody Pair貨號CAC1233

ELISA 抗體如何選擇?

會員登錄

收藏該商鋪

提示