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教你成為色譜柱操作大師

閱讀:384        發(fā)布時(shí)間:2020-8-4
  色譜柱的操作
  安裝
  1,、首先應(yīng)確認(rèn)柱和儀器的接頭以及管路是否匹配,。為減少死體積,進(jìn)樣閥,、柱子,、檢測(cè)器之間的連接管路內(nèi)徑盡可能使用內(nèi)徑較小的管線(xiàn),同時(shí)控制進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器之間連接管線(xiàn)的長(zhǎng)度,。安裝色譜柱之前,,確認(rèn)流路系統(tǒng)中的溶劑是否正常。對(duì)分析較復(fù)雜的樣品建議安裝保護(hù)柱,。
  2,、為了使色譜柱與儀器系統(tǒng)達(dá)上好的連接效果,應(yīng)盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭,,如原來(lái)的接頭長(zhǎng)期匹配其他類(lèi)型的色譜柱,,建議在連接新色譜柱前應(yīng)檢查匹配情況,避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液,。
  3,、使用PEEK 材料的通用接頭,只需用手?jǐn)Q緊不需要特定扳手,,使用壓力為5000psi;使用溫度不得超過(guò)100℃,。
  流動(dòng)相
  1、在進(jìn)行樣品檢測(cè)前,,至少使用20倍柱體積流動(dòng)相使色譜柱充分平衡,。流動(dòng)相一定要使用色譜級(jí)別的溶劑。如使用水相的緩沖液應(yīng)當(dāng)天配制以保持新鮮避免細(xì)菌產(chǎn)生,。
  2,、流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜過(guò)濾,消除流動(dòng)相中顆粒對(duì)色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動(dòng)相混合后應(yīng)重新過(guò)濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀,。不應(yīng)使用純水作為流動(dòng)相沖洗C18色譜柱,,以免柱性能損壞(添加5%的有機(jī)溶劑沖洗色譜柱,同時(shí)可以達(dá)到對(duì)緩沖鹽清洗的作用,。還可以使色譜柱更容易平衡),。
  3、流動(dòng)相需脫氣后使用,,可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測(cè)器的工作不正常,。如果測(cè)試時(shí)使用的流動(dòng)相與色譜柱保存使用的流動(dòng)相有較大區(qū)別,應(yīng)該使用過(guò)度分布的形式進(jìn)行平衡,。避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過(guò)大或流動(dòng)相緩沖鹽結(jié)晶造成對(duì)色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞,。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長(zhǎng)的平衡時(shí)間。
  樣品制備
  1,、樣品應(yīng)當(dāng)盡可能溶解在能與流動(dòng)相相互溶的溶劑中,。除特殊指明外,如使用強(qiáng)溶劑溶解樣品柱子的分辨率將可能降低,。
  2,、樣品溶液在進(jìn)樣前應(yīng)使用針頭式過(guò)濾器對(duì)樣品預(yù)先過(guò)濾,。頻繁改變流動(dòng)相組成,會(huì)加速降低柱效,。
  3,、色譜柱由高壓勻漿法裝填,能承受較高壓力,。為獲得優(yōu)質(zhì)分離效果,,使用時(shí)請(qǐng)不要超過(guò)200kgf,而且避免壓力突然上升或變化,,否則會(huì)造成硅膠填料的破壞,,減少色譜柱的使用壽命。除特殊要求外至高操作溫度不要超過(guò)60℃,。
  保存操作
  1,、如果流動(dòng)相含有酸或無(wú)機(jī)鹽,應(yīng)當(dāng)先用去離子水(20倍柱體積)沖洗干凈,。然后用用100%乙腈或甲醇保存色譜柱,。后用柱子的接頭密封,并放在穩(wěn)定的環(huán)境中存放,。
  2,、應(yīng)避免色譜柱受到直接的機(jī)械沖擊或摔落,避免造成色譜柱性能的降低,。
  色譜柱的再生
  用相當(dāng)于20倍柱體積的溶劑按下列順序沖洗柱子,建議按柱子的箭頭方向沖洗,,盡可能不反沖,。沖洗時(shí)使用的的參考溶劑順序是水、甲醇,、異丙醇,。

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