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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,!
產(chǎn)品名稱:雞軟骨細(xì)胞
組織來源:軟骨
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每3-4天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):梭形,、多角形
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
雞軟骨體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞簡介:
雞軟骨分離自軟骨組織;軟骨組織由軟骨細(xì)胞,、基質(zhì)及纖維構(gòu)成,。軟骨組織再生能力強(qiáng),這些增生的幼稚細(xì)胞形似纖維母細(xì)胞,,以后逐漸變?yōu)檐浌悄讣?xì)胞,,并形成軟骨基質(zhì),細(xì)胞被埋在軟骨陷窩內(nèi)而變?yōu)殪o止的軟骨細(xì)胞,。根據(jù)軟骨組織內(nèi)所含纖維成分的不同,,可將軟骨分為透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨三種,,其中以透明軟骨的分布較廣,,結(jié)構(gòu)也較典型。軟骨細(xì)胞(chondrocyte)位于軟骨陷窩內(nèi),。幼稚的軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層,,單個(gè)分布,體積較小,,呈橢圓形,,長軸與軟骨表面平行,越向深層的軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形,,細(xì)胞核圓形或卵圓形,,染色淺,,細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性,常見數(shù)量不一的脂滴,。成熟的軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于軟骨陷窩內(nèi),,這些軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成,稱為同源細(xì)胞群,。電鏡下,,軟骨細(xì)胞有突起和皺褶,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體,。在組織切片中,,軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形,在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙,。體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的雞軟骨采用膠原酶-聯(lián)合消化制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的雞軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)步驟:
一,、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
二、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
a)、對(duì)于貼壁細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細(xì)胞,,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b)、對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
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收到細(xì)胞如何處理,?
1,、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有,,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),。
2,、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問題,,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
3,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。
4,、靜置完成后,,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢,、拍照,,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照,、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5,、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,,可正常傳代;若未超過80%,,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松,。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時(shí),若細(xì)胞密度超過80%,,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),,補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),,直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作