基步移(genomic walking)實驗用以鑒定已經(jīng)克隆的特定DNA片段側(cè)翼順序的方法,。肥經(jīng)被鑒腚
的特定DNA片段一端或兩端的末端片段為探針去篩選基因組DNA文庫, DNA-端或兩端并與之重疊的克隆
進行篩選與定,。然后用新鑒定克隆中與原始克隆DNA非共有的一端的片股作探針，進行新的篩選與鑒
定,。依次類推,，可以弄清跨度為幾百個kb的連接片段?；熃M步移分為基因組結(jié)合文庫的染色體步移技術(shù)
和基于PCR擴增的技術(shù),。

TAIL-PCR法可用于基因步移研究。該技術(shù)通過3個嵌套的特異性弓|物分別和簡并弓|物組合進行連續(xù)的
PCR循環(huán),，利用不同的退火溫度選擇性地擴增目標(biāo)片段,所獲得的片段可以直接用做探針標(biāo)記和測序模
板,。該技術(shù)省去了諸如:酶切、連接,、加尾等傳統(tǒng)的基因克隆步驟,且克服了常規(guī)PCR不能對已知DNA
列側(cè)翼的位置序列進行擴增的缺點,，能快速地分離到目標(biāo)序列。具有:操作簡便成本低、高特異
性,、高靈敏性,、快速等優(yōu)點。
TAIL-PCR一般分為三輪PCR反應(yīng),。第一輪PCR反應(yīng) (如圖1) 由伍次高退火溫度(一 般65°C)的特異
性反應(yīng),、-次極低退火溫度(一 般25°C)的低特異性反應(yīng),，與由二個腿火溫度(一 般65°C)的高特異性
反應(yīng)與一個低退火溫度(一 般44°C) 的低特異性反應(yīng)所組成的15個熱不對稱的超級循環(huán)構(gòu)成,。通過五次高
特異性的反應(yīng)，使spI與已知的序列(載體或T-DNA等)退火并延伸,提高目標(biāo)序列的濃度,。一次低特異性的
反應(yīng)使簡粥|物結(jié)合到較多的目標(biāo)序列上,，隨后進行15次熱不對稱的超級循環(huán)。經(jīng)過上述反應(yīng)得到了不同
濃度的三種類型的產(chǎn)物:由特異性弓|物和簡并弓|物擴增出的特異性產(chǎn)物和由同一簡并引|物或特異引|物擴增
得到的非特異性產(chǎn)物,。第二輪PCR反應(yīng)(如圖2)則將第一級反應(yīng)的產(chǎn)物稀釋1000倍作為模板,，通過15次
熱不對稱的超級循環(huán)，使特異性的產(chǎn)物被選擇性地擴增,腓特異性的產(chǎn)物被壓制到極低的含量,。第三輪
PCR反應(yīng)(如圖3) 又將第二輪PCR反應(yīng)的產(chǎn)物稀釋1000倍作為模板,，-般設(shè)置為普通的PCR反應(yīng)或熱不
對稱的超級循環(huán)。通過上述三輪PCR反應(yīng)可獲得與已知序列鄰近的目標(biāo)序列,。