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慢病毒轉(zhuǎn)染穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系構(gòu)建

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更新時間:2020-05-14 15:01:30瀏覽次數(shù):3466次

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慢病毒構(gòu)建并包裝后,以進行貼壁細胞或懸浮細胞的轉(zhuǎn)染,。具體流程如下:

1. 對慢病毒基因進行改造,,即敲除U3端的400bp的特定基因,,使其逆轉(zhuǎn)錄和整合的能力,但保留產(chǎn)生病毒顆粒必須的蛋白的能力,。

2. 向上述基因中插入目的基因,。與具有包裝功能的質(zhì)粒同時進行對包裝細胞的轉(zhuǎn)染。在細胞上清中獲得攜帶目的基因的復(fù)制缺陷型慢病毒載體顆粒,。

慢病毒構(gòu)建并包裝后,,以進行貼壁細胞或懸浮細胞的轉(zhuǎn)染,。具體流程如下:

1.    對慢病毒基因進行改造,即敲除U3端的400bp的特定基因,,使其逆轉(zhuǎn)錄和整合的能力,,但保留產(chǎn)生病毒顆粒必須的蛋白的能力。

2.    向上述基因中插入目的基因,。與具有包裝功能的質(zhì)粒同時進行對包裝細胞的轉(zhuǎn)染,。在細胞上清中獲得攜帶目的基因的復(fù)制缺陷型慢病毒載體顆粒。

3.    使用上述獲得的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染目的細胞,。

4.    根據(jù)慢病毒攜帶的標記基因,,轉(zhuǎn)染得到的細胞進行熒光蛋白檢測或加入抗生素進行細胞篩選。

5.  熒光性強或者克隆數(shù)多的細胞系加以傳代培養(yǎng)并保存,。

 

Ebiofield——e生物界,,為艾柏森(江蘇)生物科技有限公司所屬的聚焦于生物醫(yī)藥外包服務(wù)一體化的品牌。Ebiofield——e生物界,,作為堅持生物技術(shù)自主開發(fā)的服務(wù)提供商,,公司在成立5年內(nèi)便迅速發(fā)展壯大,并已持續(xù)輸出轉(zhuǎn)讓了多項生物技術(shù),,獲得與多家的生命科學(xué)試劑、服務(wù)或儀器生產(chǎn)商的成功合作經(jīng)驗,。

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