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免疫共沉淀實驗

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品       牌其他品牌

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所  在  地無錫市

更新時間:2020-05-14 14:51:32瀏覽次數(shù):1566次

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免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法,。

 

其原理是:當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來,。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。目前多用精制的prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上,,使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后,,beads上的prorein A就能吸附抗原達到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔,。

 

基本流程是:細胞裂解液中加入抗體,與抗原形成特異免疫復(fù)合物,,經(jīng)過洗脫,,收集免疫復(fù)合物,然后進行SDS-PAGE及Western blotting分析,。

 

服務(wù)流程

1.        構(gòu)建含有目的基因的表達質(zhì)粒

2.        共轉(zhuǎn)細胞

3.        裂解細胞并加入誘餌蛋白的抗體,,孵育

4.        加入protein A或G以與抗體特異性結(jié)合于Agarose珠

5.        SDS-PAGE; Western Blot

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