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所 在 地無錫市
更新時間:2020-05-14 14:26:34瀏覽次數(shù):1221次
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CHIP-seq,,指的是結合位點分析法,,作用為研究體內(nèi)蛋白質與DNA相互作用,。染色質免疫共沉淀技術(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)也稱結合位點分析法,,是研究體內(nèi)蛋白質與DNA相互作用的有力工具,,通常用于轉錄因子結合位點或組蛋白特異性修飾位點的研究。
將ChIP與第二代測序技術相結合的ChIP-Seq技術,,能夠高效地在全基因組范圍內(nèi)檢測與組蛋白,、轉錄因子等互作的DNA區(qū)段。ChIP-Seq的原理是:首先通過染色質免疫共沉淀技術(ChIP)特異性地富集目的蛋白結合的DNA的片段,,并對其進行純化與文庫構建,;然后對富集得到的DNA的片段進行高通量測序。研究人員通過將獲得的數(shù)百萬條序列標簽精確定位到基因組上,,從而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白,、轉錄因子等互作的DNA區(qū)段信息。
ChIP-Seq與傳統(tǒng)的ChIP-chip技術相比具有靈敏度高,、靈活性強,、分辨率高、不具備其他芯片相關負效應等明顯優(yōu)勢,。
該技術流程主要分為兩部分:實驗數(shù)據(jù)獲取及生物信息分析,。
實驗數(shù)據(jù)獲取流程:
1. 將蛋白交聯(lián)到DNA上。以保證蛋白和DNA能夠結合,,找到互作位點,。
2. 通過超聲波剪切DNA鏈。
3. 加上附上抗體的磁珠用于免疫沉淀靶蛋白,。
4. 接觸蛋白交聯(lián),;純化DNA
5. 定量檢測,檢測合格后進行測序文庫構建,、 DNA 成簇(Cluster generation)擴增,、高通量測序。
生物信息分析流程見下圖:
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