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更新時(shí)間:2020-05-14 14:26:34瀏覽次數(shù):1358次
聯(lián)系我時(shí),,請(qǐng)告知來(lái)自 化工儀器網(wǎng)慢病毒轉(zhuǎn)染穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建
細(xì)胞傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)外包
供貨周期 | 一個(gè)月以上 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
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CHIP-seq,,指的是結(jié)合位點(diǎn)分析法,,作用為研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用。染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation,,ChIP)也稱結(jié)合位點(diǎn)分析法,,是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的有力工具,通常用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)或組蛋白特異性修飾位點(diǎn)的研究,。
將ChIP與第二代測(cè)序技術(shù)相結(jié)合的ChIP-Seq技術(shù),,能夠高效地在全基因組范圍內(nèi)檢測(cè)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA區(qū)段,。ChIP-Seq的原理是:首先通過(guò)染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA的片段,,并對(duì)其進(jìn)行純化與文庫(kù)構(gòu)建;然后對(duì)富集得到的DNA的片段進(jìn)行高通量測(cè)序,。研究人員通過(guò)將獲得的數(shù)百萬(wàn)條序列標(biāo)簽精確定位到基因組上,,從而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA區(qū)段信息,。
ChIP-Seq與傳統(tǒng)的ChIP-chip技術(shù)相比具有靈敏度高,、靈活性強(qiáng)、分辨率高,、不具備其他芯片相關(guān)負(fù)效應(yīng)等明顯優(yōu)勢(shì),。
該技術(shù)流程主要分為兩部分:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)獲取及生物信息分析。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)獲取流程:
1. 將蛋白交聯(lián)到DNA上,。以保證蛋白和DNA能夠結(jié)合,,找到互作位點(diǎn)。
2. 通過(guò)超聲波剪切DNA鏈,。
3. 加上附上抗體的磁珠用于免疫沉淀靶蛋白,。
4. 接觸蛋白交聯(lián),;純化DNA
5. 定量檢測(cè),檢測(cè)合格后進(jìn)行測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建,、 DNA 成簇(Cluster generation)擴(kuò)增,、高通量測(cè)序。
生物信息分析流程見(jiàn)下圖:
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