多肽合成

采用逐步縮合定向法以得到具有特定氨基酸順序的多肽,，把不需要反應(yīng)的氨基羧基用基團(tuán)保護(hù)起來(lái)，再進(jìn)行連接反應(yīng),，保證定向反應(yīng)的順利進(jìn)行,。

液相法和固相法是多肽合成的主要方法。固相法具有可自動(dòng)化操作,，產(chǎn)物易分離的優(yōu)勢(shì)而被更加廣泛地使用,。分為Fmoc和tBoc法，由于前者具有更大優(yōu)勢(shì),，故如今多采用Fmoc法合成,。

基本流程：

1.      去保護(hù)：Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用一種堿性溶劑（piperidine）去除氨基的保護(hù)基團(tuán)。

2.      激活和交聯(lián)：下一個(gè)氨基酸的羧基被一種活化劑所活化,?；罨膯误w與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián)，形成肽鍵,。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應(yīng)完成,。循環(huán)：這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成,。

3.      洗脫和脫保護(hù)：多肽從柱上洗脫下來(lái)，其保護(hù)基團(tuán)被一種脫保護(hù)劑（TFA）洗脫和脫保護(hù),。

多肽的修飾

多肽修飾是改變肽鏈主鏈結(jié)構(gòu)和側(cè)鏈基團(tuán)的重要手段,。多肽修飾的方法主要分為液相法和固相法。常見(jiàn)的多肽修飾是乙?；?，烷基化，生物素修飾,，磷酸化或磺酸化等,。具體修飾原理以組蛋白的乙酰化為例：

組蛋白中賴氨酸的N端殘基可發(fā)生乙?；?，且可逆。在乙?；D(zhuǎn)移酶的作用下,，在賴氨酸的N短引入乙酰基,。

多肽的耦聯(lián)

多肽的偶聯(lián)有三種方式：偶聯(lián)在多肽的N端的氨基酸上,；偶聯(lián)在多肽的C端氨基酸上；偶聯(lián)在多肽序列中的半胱氨酸上,。

用于與多肽耦聯(lián)的載體蛋白有多種,，其中常用的是keyhole limpethemacyanin (KLH),牛血清白蛋白（bovineserumalbumin，BSA）,卵清蛋白（ovalbumin,，OVA）和牛甲狀腺球蛋白（bovine thyroglobulin,，THY)。KLH具有更高的抗原性,，是常用的多肽耦聯(lián)載體,。

EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride)或carbodiimide方法是將多肽和載體耦聯(lián)的常用方法。Carbodiimides能激活天冬酰胺酸及谷氨酸的側(cè)鏈羧基集團(tuán)及末端羧基集團(tuán),，使之與主胺基發(fā)生耦聯(lián)反應(yīng),。激活的多肽與載體蛋白混合而產(chǎn)生終的共軛體。如果載體蛋白先被激活,，EDC方法則通過(guò)N－末端alpha－氨基,，或者，如果序列中有賴氨酸的話,，則可以通過(guò)賴氨酸的側(cè)鏈氨基與載體蛋白耦聯(lián),。