多肽合成

采用逐步縮合定向法以得到具有特定氨基酸順序的多肽,，把不需要反應的氨基羧基用基團保護起來,，再進行連接反應,，保證定向反應的順利進行。

液相法和固相法是多肽合成的主要方法,。固相法具有可自動化操作,，產物易分離的優(yōu)勢而被更加廣泛地使用。分為Fmoc和tBoc法,，由于前者具有更大優(yōu)勢,，故如今多采用Fmoc法合成。

基本流程：

1.      去保護：Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑（piperidine）去除氨基的保護基團,。

2.      激活和交聯：下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化,。活化的單體與游離的氨基反應交聯,，形成肽鍵,。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反應完成。循環(huán)：這兩步反應反復循環(huán)直到合成完成,。

3.      洗脫和脫保護：多肽從柱上洗脫下來,，其保護基團被一種脫保護劑（TFA）洗脫和脫保護。

多肽的修飾

多肽修飾是改變肽鏈主鏈結構和側鏈基團的重要手段,。多肽修飾的方法主要分為液相法和固相法,。常見的多肽修飾是乙酰化,，烷基化,，生物素修飾，磷酸化或磺酸化等,。具體修飾原理以組蛋白的乙?；癁槔?/span>

組蛋白中賴氨酸的N端殘基可發(fā)生乙酰化，且可逆,。在乙?；D移酶的作用下，在賴氨酸的N短引入乙?；?。

多肽的耦聯

多肽的偶聯有三種方式：偶聯在多肽的N端的氨基酸上；偶聯在多肽的C端氨基酸上,；偶聯在多肽序列中的半胱氨酸上,。

用于與多肽耦聯的載體蛋白有多種，其中常用的是keyhole limpethemacyanin (KLH),牛血清白蛋白（bovineserumalbumin,，BSA）,卵清蛋白（ovalbumin,，OVA）和牛甲狀腺球蛋白（bovine thyroglobulin，THY),。KLH具有更高的抗原性,，是常用的多肽耦聯載體。

EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride)或carbodiimide方法是將多肽和載體耦聯的常用方法,。Carbodiimides能激活天冬酰胺酸及谷氨酸的側鏈羧基集團及末端羧基集團,，使之與主胺基發(fā)生耦聯反應。激活的多肽與載體蛋白混合而產生終的共軛體,。如果載體蛋白先被激活,，EDC方法則通過N－末端alpha－氨基，或者,，如果序列中有賴氨酸的話,，則可以通過賴氨酸的側鏈氨基與載體蛋白耦聯。