大腸桿菌表達系統(tǒng)簡介

1. 代謝途徑和基因表達調(diào)控機制比較清楚

 1) 全基因組測序,，共有4405個開放性閱讀框架；

 2) 基因克隆表達系統(tǒng)成熟完善,；

 3) 繁殖迅速,，培養(yǎng)簡單，操作方便,，遺傳穩(wěn)定,。

2. 培養(yǎng)周期短

 1) 大腸桿菌繁殖能力強，在營養(yǎng)條件充足時,，20~30mins即可繁殖一代,；

 2) 大規(guī)模發(fā)酵成本低，具有巨大的生存潛力,。

3. 目標(biāo)基因表達水平高

　表達水平較一般真核表達系統(tǒng)高,，某些外源基因在大腸桿菌中的表達量可達總蛋白的5%~30%,。

4. 遺傳背景清楚

 1) 對大腸桿菌的遺傳背景和生理特性研究相當(dāng)清楚，已有多種不同的抗藥性,、不同營養(yǎng)缺陷型和不同校正突變型的菌株供選擇使用,；

 2) 可以根據(jù)不同的載體而選擇不同的菌株。

5. 抗污染能力強,，下游工藝簡單,，易于控制。

6. 已有大量可供選擇利用的表達載體,，被美國FDA批準(zhǔn)為安全的基因工程受體菌,。

艾柏森生物大腸桿菌表達系統(tǒng)優(yōu)勢

1. 艾柏森生物大腸桿菌可溶性表達成功率高達95%；

2. 艾柏森生物可以提供多種大腸桿菌表達載體,，pET28b,、pET22b、pGEX-6P-1等,。

3. 多種大腸桿菌表達宿主,，標(biāo)準(zhǔn)表達菌株BL21，可增強表達蛋白的菌株T7E,，表達毒性蛋白的C41,，增強蛋白可溶性表達的超低溫菌株Arctic，以及其他經(jīng)過艾柏森生物分子技術(shù)團隊改造過的表達菌株,，可以滿足客戶的不同需求,。

4. 表達系統(tǒng)的優(yōu)化。通過對表達系統(tǒng)進行優(yōu)化,，很大程度上解決蛋白不表達和包涵體的問題,，如表達載體與表達菌株相容性測試、誘導(dǎo)表達條件的優(yōu)化,、復(fù)性等,。

服務(wù)組合

注：

1）表達純化測試一般包括2種載體，3種表達菌株,，2個表達溫度,，12個條件的測試，根據(jù)客戶的前期實驗結(jié)果,，有可能調(diào)整或縮短試驗周期,；

2）我們可提供的備選優(yōu)化條件如下：

經(jīng)典案例

以某原核蛋白為例:

1. 優(yōu)化表達體系，包括蘇朱軍,、誘導(dǎo)溫度,、誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)劑濃度及培養(yǎng)基,。

經(jīng)過3輪優(yōu)化,，我們選擇了BL21+pGEX-6p-1組合，并發(fā)現(xiàn)溫度對與目標(biāo)蛋白的表達影響大,，如圖一

圖一:融合蛋白小試SDS-PAGE分析圖

M:ProteinMarker,；：誘導(dǎo)前總蛋白；

2：20℃上清,；3：20℃沉淀,；4：37℃上清；5：37℃沉淀,。

2. 在確定了表達條件后,，我們對蛋白進行了GST瓊脂糖親和層析嘗試純化，如圖二,，

圖二：GST瓊脂糖親和層析純化SDS-PAGE分析圖

M：Protein marker,；S：上樣；F：流出,；1：20mM GSH洗脫組分,；

3. 在確定純化效率可以接受的條件下，我們對蛋白進行了大體積發(fā)酵,，并終純化SDS-PAGE分析,，如圖三，融合蛋白經(jīng)過純化,，SDS-PAGE電泳分析在相應(yīng)位置出現(xiàn)明顯條帶,，表明目的蛋白成功得到了純化。

圖三：蛋白終純化SDS-PAGE分析圖

M：Protein marker,；1：目的蛋白

4. 蛋白濃度測定

采用SK3071 非干擾型蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度為1.06mg/mL,，待測樣品體積為10μL，結(jié)果如下：

圖四：蛋白濃度測定