技術背景：

單鏈抗體（single-chian variable fragment,，scFv）,，是由抗體重鏈的可變區(qū)與輕鏈的可變區(qū)在一段肽鏈連接下構(gòu)成的小分子，是具有抗體活性的小結(jié)構(gòu)功能結(jié)構(gòu)單位,；單鏈抗體可以由表達系統(tǒng)進行表達,，也可以用噬菌體展示技術進行制備，由于其分子量小,，穿透力強,，半衰期短，免于抗原性低等等特點,，所以在臨床診斷,，治療，預防方面有重要作用和廣闊的應用前景,，本文就單鏈抗體結(jié)構(gòu),，制備，應用等方面做一個概述,。

scFv結(jié)構(gòu),，完整的抗體由兩條重鏈和兩條輕鏈構(gòu)成,，透過人工改造，可使其直接表達可變區(qū),，通過人工合成的鏈接肽基因?qū)⒖贵w重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)連接成重組基因,，由該重組基因表達的抗體就稱之為單戀抗體，結(jié)構(gòu)上,，可將重鏈的N端與輕鏈的C端相連,，也可以將輕鏈的N端與重鏈的C端相連，鏈接肽長度通常為15-25個氨基酸,，通常由甘氨酸和絲氨酸構(gòu)成,，具有一定的彈性以及蛋白酶抗性，作用是鏈接重鏈輕鏈,，并且保持一定的彈性,，使重鏈輕鏈結(jié)合后仍然可以配對，構(gòu)成單價抗原結(jié)合位點,。

Fab片段（Fragment of antigen binding）也叫做抗原結(jié)合片段,，是抗體結(jié)構(gòu)筑龍可以與抗原結(jié)合的區(qū)域，由一條完整的輕鏈與重鏈的VH與CH1結(jié)構(gòu)域組成,，分子量約為5X104   輕鏈與重鏈均存在一個恒定區(qū)與可變區(qū),，輕重鏈之間存在二硫鍵鏈接。目前Fab抗體可以在實驗室中制備出來,。

技術簡介：

單鏈抗體的制備：

scFv可在多個表達系統(tǒng)中進行表達,，目前比較常用的，是大腸桿菌表達系統(tǒng)和哺乳動物表達系統(tǒng),。

另外可以使用噬菌體展示技術生產(chǎn)得到scFv片段,，通過免疫動物得到雜交瘤細胞，從中提取cDNA,，利用逆轉(zhuǎn)錄PCR得到全套抗體的重鏈可變區(qū)VH和輕鏈可變區(qū)VL,，利用重疊PCR將VH和VL片段擴增得到可變區(qū)基因片段，然后將基因克隆到噬菌體載體中了,，電轉(zhuǎn)感受態(tài)大腸桿菌,，輔助噬菌體超染，得到的上清液即為單鏈抗體庫,，以抗原為固相,，經(jīng)過3-5輪吸附-洗脫-擴增篩選,，即可得到單鏈抗體,。

Fab片段的制備：

目前有酶解法、利用表達系統(tǒng)制備以及利用噬菌體展示技術進行抗體庫篩選等方法進行Fab片段的制備。

酶解法：通常用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶等對免疫球蛋白G進行降解,，得到Fab,，F(xiàn)c片段等產(chǎn)物；

利用表達系統(tǒng)生產(chǎn)Fab片段：通常利用大腸桿菌表達系統(tǒng)與哺乳動物動物表達系統(tǒng),；大腸桿菌表達系統(tǒng)具有生產(chǎn)成本低,，生產(chǎn)速度快等優(yōu)點，但是容易形成包涵體,，復性后活性難以保證活性；用哺乳動物表達,，可以順利形成二硫鍵,；更接近天然Fab結(jié)構(gòu)，活性也更好,；

噬菌體展示技術：制備Fab片段抗體庫,，可經(jīng)過熟輪的篩選富集，即可得到高親和性的抗體,。

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