噬菌體展示技術(shù)服務平臺

   M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應用廣泛的文庫展示系統(tǒng)，通過將蛋白,、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達,，使之參與噬菌體組裝，并展示在噬菌體表面,，形成噬菌體展示文庫,。使用噬菌體展示文庫，針對特定靶分子進行3-5輪親和篩選,，可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體,，得到相應的 DNA序列信息。

　　艾柏森生物目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務平臺涵蓋了免疫抗體庫,、天然抗體庫等常用的文庫類型,，可根據(jù)客戶的特殊需求定制個性化文庫,，并提供靈活高效的篩選服務,。

噬菌體展示服務簡介

   M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應用廣泛的文庫展示系統(tǒng),，通過將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達,，使之參與噬菌體組裝,，并展示在噬菌體表面，形成噬菌體展示文庫,。使用噬菌體展示文庫,，針對特定靶分子進行3-5輪親和篩選，可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體,，得到相應的 DNA序列信息,。

　　艾柏森生物目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務平臺涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型,，可根據(jù)客戶的特殊需求定制個性化文庫,，并提供靈活高效的篩選服務。

艾柏森生物平臺系統(tǒng)主要包括pComb3噬菌體展示系統(tǒng)和pCANTAB5e噬菌體展示系統(tǒng):

★  pComb3噬菌體展示技術(shù)流程

1>  抗體基因庫的獲得：收集目標抗體宿主的免疫細胞,，提取細胞總RNA,；反轉(zhuǎn)錄后，使用多對引物分別擴增VH-CH1抗體基因片段和VL-CL1抗體基因片段,；

2>  抗體基因庫轉(zhuǎn)化大腸桿菌：將以上擴增的抗體基因庫連接至pComb3質(zhì)粒,，隨后電轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL12 Blue；同時鑒定基因庫庫容（及抗體基因的插入率）,；

3>  噬菌體Fab抗體庫的構(gòu)建：將輔助噬菌體VCSM13加入到轉(zhuǎn)入了抗體基因的,，生長至對數(shù)生長期的大腸桿菌中進行噬菌粒拯救；培養(yǎng)過夜后,，離心收集上清即獲得噬菌體Fab抗體庫,；

4>  抗體庫的滴度測定：取少量上述獲得的噬菌體Fab抗體庫，梯度稀釋后進行噬斑培養(yǎng)實驗,，觀察噬斑生長情況以判斷噬菌體Fab抗體庫的滴度,；

5>  噬菌體抗體庫的富集篩選：使用靶標抗原包被酶聯(lián)板，加入噬菌體抗體進行孵育,，隨后進行洗板,、洗脫；將洗脫下來的噬菌體抗體進行中和后,，再次感染細菌,，并進行第二輪的淘洗；共進行3輪淘洗,，每一輪洗脫后都進行滴度測定,；后一輪篩選時，設BSA包被的對照組以確定是否富集了大量抗BSA的噬菌體抗體。

圖1 pComb3噬菌體展示技術(shù)流程

圖2 噬菌粒載體pComb3遺傳圖譜

圖3 輔助噬菌體VCSM13遺傳圖譜

★  pCANTAB5e噬菌體展示技術(shù)流程

1>  ScFv基因庫的獲得：收集目標抗體宿主的免疫細胞,，提取細胞總RNA,；反轉(zhuǎn)錄后，使用多對引物分別擴增抗體基因VH和VL,，純化回收VH和VL片段后,，使用Linker引物將全套VH和VL基因隨機拼接成ScFv基因庫；

2>  ScFv基因庫轉(zhuǎn)化大腸桿菌：將全套 ScFv 基因片段連接至pCANTAB5e載體,，隨后電轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1,；同時鑒定ScFv基因庫庫容（及基因的插入率）；

3>  噬菌體ScFv抗體庫的構(gòu)建：將輔助噬菌體M13K07加入到轉(zhuǎn)入了ScFv抗體基因的,，生長至對數(shù)生長期的大腸桿菌中進行噬菌粒拯救,；培養(yǎng)過夜后，離心收集上清即獲得噬菌體ScFv抗體庫,；

4>  抗體庫的滴度測定：取少量上述獲得的噬菌體ScFv抗體庫,，梯度稀釋后進行噬斑培養(yǎng)實驗，觀察噬斑生長情況以判斷噬菌體ScFv抗體庫的滴度,；

5>  噬菌體抗體庫的富集篩選：使用靶標抗原包被酶聯(lián)板,，加入噬菌體抗體進行孵育，隨后進行洗板,、洗脫,；將洗脫下來的噬菌體抗體進行中和后，再次感染細菌,，并進行第二輪的淘洗,；共進行3輪淘洗，每一輪洗脫后都進行滴度測定,；后一輪篩選時,，設BSA包被的對照組以確定是否富集了大量抗BSA的噬菌體抗體。

圖1 pCANTAB5e噬菌體展示技術(shù)流程

圖2 噬菌粒載體pCANTAB5e遺傳圖譜

圖3 輔助噬菌體M13K07遺傳圖譜

噬菌體展示技術(shù)服務項目

表1 噬菌體展示技術(shù)服務項目：噬菌體展示抗體庫構(gòu)建