實(shí)驗(yàn)過(guò)程

(1)標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:標(biāo)準(zhǔn)品按照說(shuō)明書(shū)稀釋好五個(gè)梯度,，各個(gè)梯度每孔加樣量都為50μL;

(2)加樣:分別設(shè)空白孔,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40uL,，然后再加待測(cè)樣品10uL,。加樣將樣品加干酶標(biāo)板孔底部，盡最不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻;

(3)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30min ;

(4)配液洗滌:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用:小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜詈30sec后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干:

(5)加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50uL,，空白孔除外;

(6)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30min ;

(7)洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30sec后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干;

(8)顯色:每孔先加入顯色劑A50pL,，再加入顯色劑B50uL，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15min;

(9)終止:每孔加終止液50uL,，終止反應(yīng);

(10)測(cè)定:以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)是各孔的吸光度(OD值),。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15min以內(nèi)進(jìn)行,。