一,、實驗原理

通過機械劃痕在單層腫瘤細胞上制造無細胞區(qū)域,，觀察邊緣細胞向空白區(qū)遷移的能力,，模擬體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移過程
,。

二、關(guān)鍵步驟

1. ?細胞鋪板?

• 使用6孔板,，接種密度為5×10?個細胞/孔（具體依細胞類型調(diào)整）,，過夜培養(yǎng)至90%融合度
  。

• 鋪板后輕拍培養(yǎng)板兩側(cè)（非四邊）使細胞分布均勻
  ,。

2. ?劃痕制作?

• 用滅菌200μL槍頭或牙簽垂直接觸板底,，勻速劃出直線（可借助直尺對齊）
  。

• 每孔劃1-3道,，劃痕寬度建議500μm（Culture Insert法可標準化寬度）
  ,。

3. ?清洗與培養(yǎng)?

• PBS輕柔沖洗3次去除脫落細胞，換用含1-2% FBS的培養(yǎng)基抑制增殖干擾
  ,。

• 加入絲烈霉素（4μg/mL）可進一步阻斷增殖,，純化遷移效應(yīng)
  。

4. ?圖像采集與分析?

• ?時間點?：0h,、12h,、24h（依細胞遷移速度調(diào)整）
  。

• ?定位標記?：提前用Marker筆在板底畫網(wǎng)格線確保同一視野
  ,。

• ?量化方法?：

• 遷移率 = (初始寬度 - 終點寬度) / 初始寬度 ×100%,。

三、注意事項

1. ?細胞狀態(tài)?

• 選擇高活力（>95%）且低自發(fā)凋亡的腫瘤細胞系
  ,。

• 避免過度消化,，吹打時使用含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)
  。

2. ?劃痕一致性?

• 槍頭需垂直板底,，壓力均勻,，多孔實驗建議同一人操作
  。

• 預(yù)實驗確定最佳劃痕寬度（過窄易愈合,，過寬難遷移）
  ,。

3. ?干擾控制?

• 排除增殖影響：低血清培養(yǎng)基或絲裂烈素處理
  。

• 溫度穩(wěn)定：操作全程在37℃恒溫臺進行,，減少熱應(yīng)激

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