一,、服務(wù)介紹

Masson染色用于膠原纖維和肌纖維的染色及鑒定,；染色結(jié)果：膠原纖維呈藍(lán)色、肌纖維呈紅色,、細(xì)胞核呈藍(lán)黑色,。

二、實(shí)驗(yàn)原理

1.膠原纖維是人體中的結(jié)締組織的主要成分,，分布在全身的各個(gè)部位,，組成膠原纖維的主要成分是膠原蛋白。新鮮時(shí)呈白色,，故一般稱為白色纖維,。在HE染色中被染為淡紅色。它的性質(zhì)是具有韌性及緊固性,，因此它能夠抵抗的牽拉力而不至于撕裂或拉斷它們常聚集成粗細(xì)不等的束,，呈波浪狀。膠原纖維由許多根纖細(xì)的膠原纖維組成,。在電鏡下膠原原纖維又由更細(xì)的原纖維構(gòu)成,。根據(jù)Kramen和Little所進(jìn)行的電鏡研究證實(shí)，膠原纖維是*的,，具有橫紋的（重復(fù)期為650）原纖維,。當(dāng)病變時(shí)這些纖維可發(fā)生變形,，常出現(xiàn)的就是膠原纖維的壞死，膠原纖維在稀酸里可發(fā)生膨脹,，變成膠樣物,。它們能被酸性染料染成深淺不一的粉紅色，這些往往跟淀粉樣物難以區(qū)別,。由于它們的屈光率較弱,，因而在光學(xué)顯微鏡下，很難與纖維區(qū)別,。膠原纖維的分子長(zhǎng)度約為3000,，直徑約為14，分子量為300000,。

2.膠原纖維的組成：

1) 細(xì)胞內(nèi)合成前膠原蛋白分子,，成纖維細(xì)胞攝取合成蛋白質(zhì)所需的氨基酸。在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核糖體上按照特定的膠厚mRNA的堿基序列,，合成前α-多肽鏈,。后者邊合成邊進(jìn)入粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中，并在羥化酶的作用下,，將肽鏈中羥化經(jīng)羥化后,，三條前α-多肽鏈互相纏繞成繩索狀的前膠原蛋白分子。溶解狀態(tài)的前膠原蛋白分子,，兩端未纏繞,，呈球狀構(gòu)形，在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔風(fēng)或轉(zhuǎn)移到高爾基復(fù)合體內(nèi)加入糖基后,，分泌到細(xì)胞外。

2) 厚膠原蛋白分子的細(xì)胞外聚合,。細(xì)胞外的前膠原蛋白分子,，在肽內(nèi)切酶的作用下，切去分子兩端球狀構(gòu)表部分,，形成厚膠原蛋白分子,，粗約1.5nm，長(zhǎng)約300nm,，厚膠原蛋白分子平行排列聚合成膠原纖維,。聚合時(shí)，相互平的相鄰分子錯(cuò)開(kāi)1/4分子長(zhǎng)度,，同一排的分子,，菌尾相對(duì)并保持距離，聚合成束,，于是形成具有64nm周期橫紋的膠原原纖維,。聚合時(shí),，分子內(nèi)，分子間的化學(xué)基因進(jìn)行縮合,，交聯(lián),，增加厚纖維的穩(wěn)固性。若干膠原原纖維經(jīng)糖蛋白粘合成粗細(xì)子等的膠原纖維,。中性自溶型膠原（neutrla-soluble collagen）→醛糖,、縮醛類脂/肉豆蔻酸、類脂→不溶型膠原（insoluble collagen）

3.膠原纖維的顯示：

Masson染色 膠原纖維在HE染色法被染成粉紅色,，除此之外,，它還可以用一些陰離子的染料來(lái)進(jìn)行染色，如用淡綠可把它們?nèi)緸榫G色,，用甲苯胺藍(lán)可將其染為藍(lán)色,，在網(wǎng)狀纖維染色中，如不加以處理,，它又可被染為棕黃色,。常用的特殊染色法有Van Gieson.Masson和Mallary等方法,。在**細(xì)胞化學(xué)染色中，膠原纖維由于含的負(fù)電荷過(guò)多，常導(dǎo)致某些非特異性的染色,，應(yīng)特別注意。

三,、實(shí)驗(yàn)步驟

1.Van Gieson（V.G）染色法

1）試劑的配制：

weigert氏蘇木素

A液： 蘇木素 1g （haematoxylin）+ * 100ml

B液： 30%三氯化鐵 4ml （ferric chloride）+蒸餾水 95ml+鹽酸 1ml

Van Gieson氏液

A液： 酸性品紅 1g（acid fuchsin）+蒸餾水  100ml

B液： B飽和水溶液,，（1.22%）（picric acid）

注意事項(xiàng)：

Weigert氏蘇木素臨用前取A液和B液等份混合，幾個(gè)小時(shí)內(nèi)用完,，長(zhǎng)不得超過(guò)一天,。

蘇木素配后經(jīng)二十多天才能成熟，提前配制,。

該液能抵抗弱酸性染液,，對(duì)已著染的細(xì)胞核在酸性染液的作用，不易被脫去顏色,，如果不特別深染,，則無(wú)須分化。

Van Gieson氏液取B液9ml,，加入A液1ml,，即可使用。

2）操作方法：（后面的各種方法,，如沒(méi)特別說(shuō)明,，都在室溫下進(jìn)行）

切片脫蠟至水

用Weigert氏蘇木素染20min

水洗，必要時(shí)可分化

流水沖洗10min

染Van Gieson氏液1min

用95%酒精快速分化

*脫水，二甲苯透明,，封固,。

結(jié)果：

膠原纖維：鮮紅色，肌纖維： 黃*色,，紅細(xì)胞： 黃*色,，細(xì)胞核： 藍(lán)黑或灰色。

注意事項(xiàng)：

該法染完的切片,，較易褪色如需照相,，應(yīng)盡早完成。

蘇木素染液如為棕色或沉淀,，應(yīng)將其拋棄,。

分化用的酒精，應(yīng)使用95%以上的酒精,，低濃度的酒精褪色能力強(qiáng),，容易將著染的紅色脫去。

切片也可以用天青蘭蘇木素替代Weigert氏蘇木素,，染核效果基本一樣,。