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中級會(huì)員 | 第6年

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穩(wěn)定細(xì)胞株篩選

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穩(wěn)定細(xì)胞株篩選是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到染色體中,,用載體中所含的抗性標(biāo)志進(jìn)行篩選,,篩選得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白,或者穩(wěn)定表達(dá)沉默特定基因的細(xì)胞株,。

一,、服務(wù)介紹

穩(wěn)定細(xì)胞株篩選常用物理方法(電轉(zhuǎn))、化學(xué)方法(脂質(zhì)體等),、生物方法(病毒),。


二、實(shí)驗(yàn)原理

外源基因在細(xì)胞中的表達(dá)可分為兩大類,,一類是瞬時(shí)表達(dá),,一類是穩(wěn)定表達(dá)(又叫表達(dá))。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,,雖然可以達(dá)到高水平的表達(dá),,但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上,使宿主細(xì)胞可*表達(dá)目的基因,。建立穩(wěn)定細(xì)胞株,,一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選。常用的抗性標(biāo)記基因有潮霉素(hygromycin),、和嘌呤霉素(puromycin),。


三、實(shí)驗(yàn)流程

1,、載體構(gòu)建(表達(dá)質(zhì)粒載體,、病毒載體);

2,、轉(zhuǎn)染/感染,;

3、目的蛋白初步檢測,;

4,、抗生素篩選;


5,、目的蛋白再次檢測(定性/半定量),;

6、單克隆細(xì)胞株穩(wěn)定性檢測,。


四,、 客戶提供

培養(yǎng)好的細(xì)胞


五、 公司提供:

基本實(shí)驗(yàn)步驟,、圖片,、數(shù)據(jù)分析結(jié)果和穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株

實(shí)驗(yàn)周期:大約3-4月左右,具體需要根據(jù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定,。


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