1. C57小鼠,，8-10周,，通過(guò)頸椎脫位處死，浸入75%乙醇浸泡5分鐘,，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤(pán)中,。

2. 使用眼科剪和鑷子，使髖關(guān)節(jié)脫臼,，保持股骨頭完整,。

3. 用止血鉗去除每個(gè)股骨頭的軟骨帽，將組織放入含2%雙抗的PBS中,。

4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍,，將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中。

5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片,，加入3ml預(yù)熱的Collagenase D（1.5mg/ml）,。

6. 放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第一次消化,，時(shí)間2h ,。

7. 第一次消化結(jié)束后，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化,，40um的細(xì)胞篩過(guò)濾后,，離心1500rpm，2min,。

8. 沉淀用DMEM培養(yǎng)基重懸,，計(jì)數(shù)，種植在24孔板中,。

9. 在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D,，放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第二次消化,，時(shí)間2h,，然后收集細(xì)胞。