北京BiometraPCR儀維修服務(wù),。專注維修,!
Biometra pcr儀技術(shù)支持,Biometra pcr儀維修故障解決:
1,,電源壞,,開機無反應(yīng)。
2,,觸摸屏壞,,按鍵無反應(yīng)。
3,,電源放大板壞,,各種報錯。
4,,主板壞,,各種報錯。
5,,Block壞,,溫度不準。
德國Biometra公司于1985年成立,,1989年推出三槽PCR儀,,并創(chuàng)意地用Peltier元件控制升降溫過程。事實證明,,Biometra的選擇是正確的,,因而成就了其在PCR儀領(lǐng)域的主導(dǎo)地位。Biometra的T系列PCR儀由Tpersonal,、T1,、Tgradient、T3000和Trobot五類產(chǎn)品組成,,可以滿足不同實驗室的實際需要,。
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Biometra熱循環(huán)儀具有下列突出優(yōu)點:
鍍金銀槽——熱傳導(dǎo)性,是鋁質(zhì)近2倍,,保證了整個熱槽以高度的均一性實現(xiàn)溫度的快速升降,。
智能熱蓋——預(yù)設(shè)的熱蓋壓力使實驗具有良好的操作性和重復(fù)性。
極低功耗——比同類產(chǎn)品降低了功耗,,因而噪音低,,產(chǎn)熱少,優(yōu)化實驗環(huán)境,。
BiometraPCR儀 - 技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑,。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,,根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝,。在聚合酶鏈式反應(yīng)實驗中發(fā)現(xiàn),,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈,。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,,并設(shè)計引物做啟動子,,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制,。
但是,,DNA聚合酶在高溫時會失活,因此,,每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶,,不僅操作煩瑣,而且價格昂貴,,制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展,。發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,,不需要每個循環(huán)加酶,,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,,并逐步應(yīng)用于臨床
1)內(nèi)參照法:在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標記,,下游引物不標記。在模板擴增的同時,,內(nèi)標也被擴增,。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高 效液相分離開來,,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板
2)競爭法:選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板,。在同一反應(yīng)管中,,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高 效液相將兩種產(chǎn)物分開,,分別測定熒光強度,,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)
3)PCR-ELISA法:利用標記引物,,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,,最終酶使底物顯色,。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,,作出標準曲線,,也可實現(xiàn)定量檢測目的
2.內(nèi)標在傳統(tǒng)定量中的作
由于傳統(tǒng)定量方法都是終點檢測,即PCR到達平臺期后進行檢測,,而PCR經(jīng)過對數(shù)期擴增到達平臺期時,,檢測重現(xiàn)性極差,。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實驗,所得結(jié)果有很大差異,因此無法直接從終點產(chǎn)物量推算出起始模板量,。加入內(nèi)標后,,可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準確性,。但即使如此,,傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法
建立樣品準備
這個區(qū)域?qū)iT用作樣品的準備,,在制備和操作用于核酸提取的試劑時應(yīng)該采取預(yù)防措施:⑴PCR產(chǎn)物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作,。⑵組織培養(yǎng)物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理,,以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA,。⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列,。⑷DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作,,以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。⑸大體積樣品應(yīng)該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取,。⑹管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生,,而且管子不能用力崩開,這樣會產(chǎn)生氣溶膠,。⑺任何時候都應(yīng)該穿實驗服和帶手套,,手套要經(jīng)常更換,尤其在抽提過程中每一步之間都要更換,。實驗服要專門用于樣品準備間,,經(jīng)常清洗
2、樣品準備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,,這樣增加了樣品之間污染的機會,。為了避免這一問題,反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準備區(qū)進行,。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報道
3,、建立前PCR區(qū)
該去專門用于準備各種反應(yīng),,這個區(qū)域必須保持干凈,而且沒有來自克隆和樣品準備的污染,。前PCR區(qū)必須要有試劑和準備,,特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。
耶拿PCR儀, 高品質(zhì),;舒適,;溫度梯度功能;合理的散熱設(shè)計,;開放的系統(tǒng);經(jīng)久耐用,。
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