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儀器種類 梯度PCR儀 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥,綜合
北京BiometraPCR儀售后維修服務(wù),。專注售后。
Biometra pcr儀技術(shù)支持,Biometra pcr儀維修故障解決:
1,,電源壞,,開機(jī)無(wú)反應(yīng)。
2,,觸摸屏壞,,按鍵無(wú)反應(yīng)。
3,,電源放大板壞,,各種報(bào)錯(cuò)。
4,,主板壞,,各種報(bào)錯(cuò)。
5,,Block壞,,溫度不準(zhǔn)。
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4,,主板壞,,各種報(bào)錯(cuò),。

5,Block壞,,溫度不準(zhǔn),。

德國(guó)Biometra公司于1985年成立,1989年推出三槽PCR儀,,并創(chuàng)意地用Peltier元件控制升降溫過(guò)程,。事實(shí)證明,Biometra的選擇是正確的,,因而成就了其在PCR儀領(lǐng)域的主導(dǎo)地位,。Biometra的T系列PCR儀由Tpersonal、T1,、Tgradient,、T3000和Trobot五類產(chǎn)品組成,可以滿足不同實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際需要,。

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 Biometra熱循環(huán)儀具有下列突出優(yōu)點(diǎn):

鍍金銀槽——熱傳導(dǎo)性,,是鋁質(zhì)近2倍,保證了整個(gè)熱槽以高度的均一性實(shí)現(xiàn)溫度的快速升降,。

智能熱蓋——預(yù)設(shè)的熱蓋壓力使實(shí)驗(yàn)具有良好的操作性和重復(fù)性,。

極低功耗——比同類產(chǎn)品降低了功耗,因而噪音低,,產(chǎn)熱少,,優(yōu)化實(shí)驗(yàn)環(huán)境。

BiometraPCR儀 - 技術(shù)原理:

DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑,。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝,。在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),,DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈,。因此,,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,,加入DNA聚合酶,、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。  

但是,,DNA聚合酶在高溫時(shí)會(huì)失活,,因此,每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶,不僅操作煩瑣,,而且價(jià)格昂貴,,制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷,、同時(shí)也大大降低了成本,,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床

1)內(nèi)參照法:在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成,。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記,。在模板擴(kuò)增的同時(shí),,內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高 效液相分離開來(lái),,分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板

2)競(jìng)爭(zhēng)法:選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記),。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,,而待測(cè)模板不被酶切,,可通過(guò)電泳或高 效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)

3)PCR-ELISA法:利用標(biāo)記引物,,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,,最終酶使底物顯色,。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),,作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的

2.內(nèi)標(biāo)在傳統(tǒng)定量中的作

由于傳統(tǒng)定量方法都是終點(diǎn)檢測(cè),即PCR到達(dá)平臺(tái)期后進(jìn)行檢測(cè),,而PCR經(jīng)過(guò)對(duì)數(shù)期擴(kuò)增到達(dá)平臺(tái)期時(shí),,檢測(cè)重現(xiàn)性極差。同一個(gè)模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實(shí)驗(yàn),所得結(jié)果有很大差異,,因此無(wú)法直接從終點(diǎn)產(chǎn)物量推算出起始模板量,。加入內(nèi)標(biāo)后,可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準(zhǔn)確性,。但即使如此,,傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法

建立樣品準(zhǔn)備

這個(gè)區(qū)域?qū)iT用作樣品的準(zhǔn)備,,在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)該采取預(yù)防措施:⑴PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作,。⑵組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理,,以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA,。⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列,。⑷DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作,,以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。⑸大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無(wú)菌一次性移液管吸取,。⑹管子打開前都要簡(jiǎn)短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生,,而且管子不能用力崩開,這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠,。⑺任何時(shí)候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套,,手套要經(jīng)常更換,尤其在抽提過(guò)程中每一步之間都要更換,。實(shí)驗(yàn)服要專門用于樣品準(zhǔn)備間,,經(jīng)常清洗

2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,,這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì),。為了避免這一問題,反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行,。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道

3,、建立前PCR區(qū)

該去專門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng),這個(gè)區(qū)域必須保持干凈,,而且沒有來(lái)自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染,。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備,特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管,。

耶拿PCR儀, 高品質(zhì),;舒適;溫度梯度功能,;合理的散熱設(shè)計(jì),;開放的系統(tǒng);經(jīng)久耐用。

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