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一、簡(jiǎn)介：

  在進(jìn)行微生物試驗(yàn)時(shí),，菌種的挑選特別重要,。除了要選對(duì)菌種外，還要注意對(duì)菌體生長(zhǎng)狀態(tài)的把握,。

  通常來說很多標(biāo)準(zhǔn)中都對(duì)試驗(yàn)用菌有要求,，有的會(huì)明確要求用培養(yǎng)多長(zhǎng)時(shí)間的菌進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)，食品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中經(jīng)?？梢钥吹竭@類描述，如“挑取單個(gè)典型黑色菌落接種到FTG培養(yǎng)基,，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h,，用于后續(xù)的確證試驗(yàn)。"“取生長(zhǎng)旺盛的FTG培養(yǎng)液1 mL接種于含鐵牛乳培養(yǎng)基……"（參考GB4789.13  食品微生物學(xué)檢驗(yàn)  產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)）,，而有些標(biāo)準(zhǔn)則不厭其煩地強(qiáng)調(diào)“新鮮培養(yǎng)物",，如《中國(guó)藥典》中，在培養(yǎng)基靈敏度檢查部分,，就再三強(qiáng)調(diào)這一點(diǎn),，“菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌,、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上,，接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30°C～35°C培養(yǎng)18h～24h,；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上"（參考《中國(guó)藥典》 2020版  第157頁）……

二,、試驗(yàn)說明

  標(biāo)準(zhǔn)中之所以這么要求，是希望能用最god狀態(tài)的菌種,，做出zui明顯的效果,，保證試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。本文以平板上不同區(qū)域菌體的形態(tài)差別對(duì)此問題進(jìn)行說明：分別將大腸埃希氏菌（典型的革蘭氏陰性菌）和金黃色葡萄球菌（典型的革蘭氏陽性菌）,，在TSA平板上三區(qū)劃線,、培養(yǎng)，然后將每種菌分別從同一平板上的三個(gè)區(qū)域挑菌、涂片,、鏡檢,，觀察它們的菌體形態(tài)，為了方便觀察,，涂片后先用結(jié)晶紫進(jìn)行染色,，再進(jìn)行鏡檢觀察。結(jié)果如下（圖1,、圖3）：

圖1 大腸埃希氏菌在平板上三區(qū)劃線培養(yǎng)后的菌落及菌體狀態(tài)

  大腸埃希氏菌(Escherichia coli,，E.coli)，革蘭氏陰性短桿菌,，大小0.5微米~0.5×3微米,。從鏡檢結(jié)果不難發(fā)現(xiàn)，同一平板上不同區(qū)域長(zhǎng)出的菌體,，形態(tài)差別非常明顯：一區(qū)的菌體為短桿狀甚至點(diǎn)狀,，有些菌體已經(jīng)明顯衰亡；二區(qū)桿狀形態(tài)的菌體明顯增多,，且比一區(qū)的桿狀菌體較長(zhǎng),、較粗；三區(qū)菌體全部為較長(zhǎng)的桿狀且非常粗壯,，與對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌體在掃描電鏡下的狀態(tài)基本一致（如圖2）,。

圖2 掃描電鏡下對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的大腸埃希氏菌形態(tài)

金黃色葡萄球菌，作為一種典型的革蘭氏陽性菌,，三個(gè)區(qū)域內(nèi)菌體差異雖然沒有那么顯著,，但也呈現(xiàn)出同樣的規(guī)律（如圖3）。

圖3 金黃色葡萄球菌在平板上三區(qū)劃線培養(yǎng)后的菌落及菌體狀態(tài)

三,、討論：

  同一平板的不同區(qū)域的同一種菌呈現(xiàn)不同的形態(tài),，可以直觀解釋為一區(qū)菌體密度太大，二區(qū)次之,，三區(qū)菌體密度較小所致,。其根本原因在于，同等面積的區(qū)域上菌體密度過大,，會(huì)造成菌體間營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng),，有些菌體因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)不良生長(zhǎng)較差或長(zhǎng)不出來，同時(shí)區(qū)域內(nèi)的優(yōu)勢(shì)菌株還可能產(chǎn)生一些細(xì)胞毒素等,，遏制其它菌體的生長(zhǎng),。而三區(qū)內(nèi)的菌營(yíng)養(yǎng)比較充足，生長(zhǎng)幾乎不受影響,，所以菌體狀態(tài)最好,。

  我們做實(shí)驗(yàn)時(shí),，通常都會(huì)要求用生長(zhǎng)狀態(tài)最幫的菌，有時(shí)候用新鮮菌體能做出很明顯的陽性結(jié)果,，但如果菌體不新鮮,，就會(huì)形成假陰性結(jié)果（參考氧化酶試驗(yàn)的操作方法及注意要點(diǎn)）。

  綜上所述,，在微生物試驗(yàn)過程中,，無論制作菌液還是進(jìn)行菌株鑒定等，一定要注意菌體的新鮮度和菌體的健壯程度,，盡量選用新鮮健壯的菌體進(jìn)行試驗(yàn),。如果是在平板上挑菌，我們通常挑取三區(qū)生長(zhǎng)的單菌落進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn),。

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