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專性厭氧菌的培養(yǎng)方法及注意事項(xiàng)
閱讀：543 發(fā)布時(shí)間：2024-7-31一,、專性厭氧菌的介紹
根據(jù)細(xì)菌生長對(duì)氧的需求，主要可分為四大類：專性需氧菌,、兼性厭氧菌,、專性厭氧菌,、微需氧菌,。
專性厭氧菌需要在嚴(yán)格無氧的氣體環(huán)境中生長，氧氣會(huì)對(duì)菌產(chǎn)生毒害作用,，也有一些厭氧菌在含5%-10%二氧化碳?xì)怏w環(huán)境中可耐受低濃度的氧氣,。常見的專性厭氧菌有梭菌屬（如產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌,、破傷風(fēng)梭菌,、艱難梭菌等）、雙歧桿菌屬（如嬰兒雙歧桿菌,、動(dòng)物雙歧桿菌等）,、擬桿菌屬、梭桿菌屬,、厭氧消化鏈球菌屬等,。
二、厭氧培養(yǎng)環(huán)境的構(gòu)造
（1）使用厭氧培養(yǎng)箱,，通氣培養(yǎng),。一些厭氧培養(yǎng)箱可同時(shí)進(jìn)行接種等微生物操作，并直接進(jìn)行培養(yǎng),，操作方便,，成功率高，缺點(diǎn)是多數(shù)實(shí)驗(yàn)室不具備,，損耗較大,，對(duì)于小規(guī)模的培養(yǎng)試驗(yàn)來說，成本較高,。
（2）使用厭氧罐,、厭氧盒或厭氧培養(yǎng)袋+厭氧產(chǎn)氣包,，可制作小型或中型空間的厭氧環(huán)境，操作方便,，不需要任何復(fù)雜的專門設(shè)備,，可在所有實(shí)驗(yàn)室中使用，非常適合實(shí)驗(yàn)室中小規(guī)模的試驗(yàn)操作,。
注意事項(xiàng)：培養(yǎng)基必須與厭氧環(huán)境氣體流通,，如使用試管、錐形瓶等容器培養(yǎng),，必須確保塞子透氣,；培養(yǎng)平皿時(shí)，必須保證平皿的透氣性良好,，不能使用封口膜密閉纏繞,。
厭氧產(chǎn)氣包的介紹 點(diǎn)擊查看
（3）液體培養(yǎng)基可采用覆蓋石蠟隔絕氧氣的方法，如皰肉培養(yǎng)基,、梭菌增菌培養(yǎng)基等,，在培養(yǎng)基配制完成分裝后，在培養(yǎng)基上方覆蓋約0.5-1cm厚度的液體石蠟,，再進(jìn)行滅菌處理,，可直接進(jìn)行厭氧菌的培養(yǎng)，無需使用厭氧培養(yǎng)箱或厭氧罐等設(shè)備,。
注：在滅菌前覆蓋石蠟,，滅菌過程中培養(yǎng)基中溶解的氧氣會(huì)逸出，冷卻后石蠟會(huì)阻隔空氣中氧氣的進(jìn)入,，可以更好的制造厭氧環(huán)境,；培養(yǎng)基中也可補(bǔ)加一定量的還原性鐵粉或硫乙醇酸鈉、半胱氨酸等還原性成分,，幫助維持厭氧環(huán)境,。
（4）有些培養(yǎng)基可自然的形成厭氧環(huán)境，無需厭氧培養(yǎng),，如硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基,，靜置過程會(huì)自發(fā)分層，下層為無氧環(huán)境,，無需任何厭氧設(shè)備,，也無需覆蓋液體石蠟，即可培養(yǎng)厭氧菌,。
三,、常見厭氧菌的培養(yǎng)基
1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基
此培養(yǎng)基常用于梭菌的活化及增菌培養(yǎng)，也可對(duì)營養(yǎng)成分進(jìn)行改良用于一些營養(yǎng)要求較高的厭氧菌的培養(yǎng),，此培養(yǎng)基可自然的形成厭氧環(huán)境,，無需厭氧培養(yǎng),，此培養(yǎng)基靜置過程會(huì)自發(fā)分層，下層為無氧環(huán)境,，無需任何厭氧設(shè)備,，也無需覆蓋液體石蠟，即可培養(yǎng)厭氧菌,。
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基介紹 點(diǎn)擊查看
2.皰肉培養(yǎng)基
相比較于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基,，此培養(yǎng)基需覆蓋液體石蠟，用于培養(yǎng)梭菌時(shí),，可以存活更長時(shí)間（如生孢梭菌,，在硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中只能存活數(shù)天，而在皰肉培養(yǎng)基中可存活數(shù)月以上）,。
皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)介紹 點(diǎn)擊查看
3.GAM/改良GAM培養(yǎng)基
此培養(yǎng)基營養(yǎng)非常豐富,，適用于絕大多數(shù)的厭氧菌培養(yǎng)，特別是用于比較難培養(yǎng)的營養(yǎng)苛求型細(xì)菌（如擬桿菌屬）,。
GAM培養(yǎng)基介紹 點(diǎn)擊查看
4.血平板/CDC厭氧菌瓊脂
營養(yǎng)豐富,，適用于絕大多數(shù)厭氧菌的培養(yǎng)（梭菌、擬桿菌等均可培養(yǎng)）,。
CDC厭氧菌瓊脂介紹 點(diǎn)擊查看
5.MRS瓊脂/肉湯
用于雙歧桿菌的培養(yǎng),，制備好的MRS肉湯培養(yǎng)基澄清透明無沉淀,，常用于乳酸菌或雙歧桿菌的活化,、增菌及收集菌體。
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MRS肉湯介紹 點(diǎn)擊查看
四,、注意事項(xiàng)
（1）培養(yǎng)基的制備
需覆蓋石蠟的液體培養(yǎng)基,，應(yīng)在滅菌前完成分裝并覆蓋液體石蠟；流體培養(yǎng)基或半固體培養(yǎng)基在有氧條件下培養(yǎng)厭氧菌時(shí),，使用前可采用沸水浴或其他除氧方式排出培養(yǎng)基內(nèi)溶解的氧氣.
（2）操作過程
因氧氣會(huì)對(duì)厭氧菌產(chǎn)生毒害作用,，因此整個(gè)操作過程應(yīng)在專門的無氧設(shè)備中進(jìn)行。如在正?？諝庵胁僮?，從厭氧菌暴露在空氣中開始到放入?yún)捬醐h(huán)境中培養(yǎng)結(jié)束，整個(gè)過程應(yīng)盡可能快速操作,，一般不超過15分鐘,，暴露時(shí)間越長，厭氧菌越容易死亡,。
（3）培養(yǎng)環(huán)境
可采用厭氧罐,、厭氧培養(yǎng)箱、厭氧產(chǎn)氣包等方式提供厭氧環(huán)境,，除了確保氣體環(huán)境無氧之外,，有些厭氧菌通常還需要5%-10%的二氧化碳,、氫氣等氣體促進(jìn)生長并提高厭氧菌對(duì)氧氣的耐受性，更容易培養(yǎng)成功,。
注:本文屬海博生物原創(chuàng),未經(jīng)允許不得轉(zhuǎn)載,。