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硝酸鹽還原試驗的簡單介紹
閱讀:479 發(fā)布時間:2024-4-22一、培養(yǎng)基用途:
以HB0277硝酸鹽肉湯為例,,該培養(yǎng)基用于蠟樣芽孢桿菌的硝酸鹽還原試驗,。
二、培養(yǎng)基成分及使用方法:
1. 培養(yǎng)基成分
2.使用方法
稱取本品9.0g,,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,,分裝試管,每管5mL(觀察產(chǎn)氣需加小倒管),,121℃高壓滅菌15min,。
此培養(yǎng)基需配套HB8282硝酸鹽還原試劑使用。
三,、原理:
蛋白胨和牛肉粉提供碳源,、氮源、維生素和生長因子,;某些細菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽,、氨或氮氣。滴加硝酸鹽還原試劑后若試驗菌培養(yǎng)物中有亞硝酸鹽,,可與乙酸,、對苯氨基苯磺酸和α-萘胺反應(yīng)生成紅色的N-α-苯胺偶氮苯磺酸,。若試驗菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽進一步轉(zhuǎn)化為氮氣,則小倒管中會有氣體囤積,,判定為陽性,。若試驗菌可將亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氨,則滴加硝酸鹽還原試劑呈無色反應(yīng),,此時需加入適量鋅粉證明培養(yǎng)物中是否有未被利用的硝酸鹽存在,,若加入鋅粉后為無色則證明無硝酸鹽,則可判斷為陽性,。試驗菌不利用硝酸鹽,,滴加硝酸鹽還原試劑后為無色,加入鋅粉后變?yōu)榧t色,,證明培養(yǎng)物中有未被利用的硝酸鹽被鋅粉還原為亞硝酸鹽產(chǎn)生紅色反應(yīng),,此時判斷為陰性,。
四,、實驗結(jié)果:
1、按使用方法制備培養(yǎng)基,,接種以下質(zhì)控菌株,,在35±1℃需氧培養(yǎng)24±2h。
圖1-2 硝酸鹽還原試驗結(jié)果
a: 大腸埃希氏菌ATCC25922,,b: 銅綠假單胞菌ATCC27853,,
c:蠟樣芽胞桿菌CMCC63303(培養(yǎng)3d),d: 單增李斯特氏菌ATCC19114
五,、注意事項
由于某些菌利用硝酸鹽緩慢,,可延長時間培養(yǎng),結(jié)果為陽性依然可判定為利用硝酸鹽陽性,。