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埃澤思細(xì)胞凍存液

ES/iPS Crypreservation Media

一,、產(chǎn)品基本信息

二,、產(chǎn)品簡介

ES/iPS 埃澤思細(xì)胞凍存液是埃澤思生物（Applied Cell®）自主開發(fā)的一款無血清、無需程序降溫的干細(xì)胞凍 存液,，適用于人多能干細(xì)胞（hES/hiPS）的凍存,。本產(chǎn)品生產(chǎn)過程遵循 ISO9001 體系,并符合 GMP 指導(dǎo) 原則。

三,、產(chǎn)品特性

? 安全：無外源蛋白成分,，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險(xiǎn),。

? 穩(wěn)定：全程無血清生產(chǎn),，批次間差異小。

? 高效：凍存細(xì)胞復(fù)蘇率高于 90%,。

? 簡單：即用型產(chǎn)品,，且無需程序降溫可直接-80℃過夜后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。

四,、產(chǎn)品內(nèi)容

五,、相關(guān)產(chǎn)品

人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001000）

人多能干細(xì)胞消化液（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001008）

無血清細(xì)胞凍存液（治療級）（Applied Cell®:AC-1001006）

即用型基質(zhì)膠（Applied Cell®: Cat. no. C-1001007）

六、細(xì)胞凍存操作方法

1. 準(zhǔn)備對數(shù)期生長的干細(xì)胞,，加入人多能干細(xì)胞消化液（AC-1001008）消化 3~5 min,，用 2mL 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001000）制備成細(xì)胞懸液；

2. 1200 rpm 3min 離心,，棄上清,，用 1.5-2mL ES/iPS 細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，細(xì)胞密度 1×106~1×107 /mL,；

3. 轉(zhuǎn)移至凍存管中,，無需程序降溫，直接將待凍存細(xì)胞置于 -80℃過夜,，后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存,，凍 存時(shí)注意直立放置凍存管；

七,、細(xì)胞復(fù)蘇

1. 基質(zhì)膠包被培養(yǎng)板：取出 6 孔板/12 孔板,，每孔內(nèi)加入 1 mL/0.5 mL 即用型基質(zhì)膠（AC-1001007）， 輕輕晃動 6 孔板/12 孔板使基質(zhì)膠*覆蓋皿底,，置于 37℃培養(yǎng)箱中孵育 1h~2h,，實(shí)驗(yàn)前拿出并置于 超凈工作臺/生物安全柜中室溫下平衡 20min。如果暫時(shí)不用,，可用 Parafilm 封口后 2-8℃ 儲存,，并 于 1 周內(nèi)使用,。

注意：①一支凍存的干細(xì)胞的數(shù)量在 1×106cells/mL 左右，對應(yīng) 6 孔板 1 孔,；②即用型基質(zhì)膠對溫 度敏感,，即用即拿，用完后立即放回 4℃冰箱保存,，且勿用手直接觸碰基質(zhì)膠液面所及的瓶身,，影響 基質(zhì)膠質(zhì)量。

2. 先將 2~3mL 的干細(xì)胞培養(yǎng)基加入 15mL 離心管中備用,。

3. 解凍：將從液氮中取出的凍存管快速浸入 37℃溫水中,，快速搖動，使其在 1~2min 內(nèi)快速解凍,； 注意：細(xì)胞從液氮中拿出的速度要快,，盡量減少其暴露在室溫中的時(shí)間。

4. 離心：凍存管中的凍存液解凍后,，將其逐滴加入含有干細(xì)胞培養(yǎng)基的 15mL 離心管中，將 15mL 離心 管置于低速離心機(jī)中配比平衡后,，1200 rpm 離心 3min,；

5. 重懸：離心后棄上清加 1mL 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基對干細(xì)胞沉淀進(jìn)行吹吸混勻，吹吸 3~5 次左右,。

6. 接種：吹吸均勻后,，將已經(jīng)平衡好的即用型基質(zhì)膠棄掉，將吹打均勻的干細(xì)胞懸液加入到已經(jīng)包被 好的 6 孔板中,，并補(bǔ)全每孔 2mL 培養(yǎng)體系,。

7. 培養(yǎng)：接種后的 6 孔板可以置于倒置相差顯微鏡下觀察接種的干細(xì)胞密度以及細(xì)胞團(tuán)塊大小，呈 4 個(gè) 細(xì)胞以上的團(tuán)塊較合格,，水平十字輕輕晃動 6 孔板/12 孔板使細(xì)胞均勻分布,。并置于 37℃，5% CO2 的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng),，第 2 天觀察細(xì)胞貼壁情況,；

八、細(xì)胞形態(tài)圖

九,、質(zhì)量控制