天根DNA純化膠回收試劑盒 DP214

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒采用緩沖體系和離心吸附柱,，既可從TAE 或TBE 瓊脂糖凝膠中回收DNA 片段，又可用于直接純化PCR 產(chǎn)物,，能夠滿足多種實(shí)驗(yàn)需要,。溶膠液PC 中含有pH 指示劑，可根據(jù)顏色來判斷溶膠狀態(tài),。使用本產(chǎn)品可回收100 bp- 8 kb 大小的DNA 片段,，回收率 可達(dá)80%。使用本試劑盒回收的DNA 可直接用于連接,、轉(zhuǎn)化,、酶切、測(cè)序等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

■ 兼容性強(qiáng)：既可用作DNA 產(chǎn)物直接純化,，又可用作DNA 凝膠回收。

■ 操作簡(jiǎn)便,、可回收膠體積大：可按照膠塊與溶膠液等比進(jìn)行溶膠,。

■ 穩(wěn)定、可靠：配有指示劑,，可直觀判斷影響DNA 吸附的pH 值,，又可判斷DNA 與膜是否充分結(jié)合,，提高回收效率。

天根DNA純化膠回收試劑盒 DP214

產(chǎn)品組成：

DP214-02 (50 preps)：

溶液PC(Buffer PC) 25 ml

平衡液BL(Buffer BL) 30 ml

漂洗液PW(Buffer PW) 15 ml

洗脫緩沖液EB(Buffer EB) 15 ml 

吸附柱CB2(Spin Columns CB2)50個(gè) 50個(gè) 5 個(gè)

收集管(2 ml)(Collection Tubes (2 ml)) 切膠器(Gel Cutter) ,。

DP214-03 (200preps)：

溶液PC(Buffer PC) 100 ml

平衡液BL(Buffer BL) 120 ml

漂洗液PW(Buffer PW) 50 ml

洗脫緩沖液EB(Buffer EB) 30 ml 

吸附柱CB2(Spin Columns CB2) 200個(gè) 200個(gè) 20個(gè)

收集管(2 ml)(Collection Tubes (2 ml)) 切膠器(Gel Cutter) ,。

天根DNA純化膠回收試劑盒 DP214

儲(chǔ) 存 條 件

 該試劑盒所有組分置于室溫(15-30℃)干燥條件下，可保存12個(gè)月,。若溶液產(chǎn)生沉 淀,，使用前可在37℃水浴中預(yù)熱10min以溶解沉淀，不影響效果,。

產(chǎn) 品 簡(jiǎn) 介

本試劑盒采用離心吸附柱,，既能從TAE或TBE瓊脂糖凝膠中回收DNA片段，又 能用于直接純化PCR產(chǎn)物,，滿足多種實(shí)驗(yàn)需要,。溶液PC中含有pH指示劑，可根據(jù)顏色來 判斷溶膠或PCR產(chǎn)物回收是否達(dá)到最佳狀態(tài),。使用本產(chǎn)品可回收100 bp-8 kb大小的DNA 片段,，回收率可達(dá)80%,大于8 kb的DNA片段純化建議使用我公司的瓊脂糖凝膠回收試劑 盒DP208/209或DNA產(chǎn)物純化試劑盒DP203/204。每個(gè)離心吸附柱每次可吸附的DNA量為 10   μg,。

使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作,，包括酶切、PCR,、測(cè)序,、文庫(kù)篩選、 連接和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn),。

注 意 事  項(xiàng)    請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng),。

1. 平衡液BL的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩(wěn)定性，消除高溫 /潮濕或其他不良環(huán)境因素對(duì)吸附柱造成的影響,。使用前請(qǐng)先檢查平衡液BL是否出現(xiàn)渾 濁,，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘,，即可恢復(fù)澄清,。

2. 溶液PC含有pH指示劑，為黃色,，指示pH≤7.5,。

天根試劑盒-DNA純化膠回收試劑盒-DP214操 作 步 驟

使用前請(qǐng)先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽,。

一 ,、從 瓊 脂 糖 凝 膠 中 回 收 D N A 片 段

1. 柱平衡步驟：向吸附柱CB2中(  吸附柱放入收集管中) 加入500μl平衡液BL,12 .000 rpm  (~13.400×g )離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。   （請(qǐng) 使 用 當(dāng)天處理過的柱子)

2. 將單 一 的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下 l盡量切除多余部分) 放入干凈的離心管 中,，稱取重量,。

注意：使用切膠器(OSE-GC)切膠時(shí)，切膠器口對(duì)準(zhǔn)瓊脂糖凝膠中

的DNA條帶下壓切割,。切膠完成后,，推動(dòng)中心桿，將膠塊推入干凈

的離心管中,。根據(jù)凝膠膠孔寬度可進(jìn)行單次和連續(xù)切割,。

3. 向膠塊中加入等倍體積溶液PC(如果凝膠重為0.1 g,其體積可視為100 μl,則加入100 μl PC溶液。使用切膠器切割1%的瓊脂糖凝膠,，單塊重量約為0.06 g,實(shí)際膠塊重量與凝膠 濃度及厚度相關(guān)),50℃水浴放置10 min左右，其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管,，以確 保膠塊充分溶解,。  ( 若膠塊的體積過大，可事先將膠塊切成碎塊)

注意：對(duì)于回收<150 bp的小片段可將溶液PC的體積增加到3倍以提高回收率,；膠塊溶解后最好將溶液溫度降至室溫再上柱,，因?yàn)槲街谑覝貢r(shí)結(jié)合DNA的能力較強(qiáng)。凝膠融解后應(yīng)呈現(xiàn)黃色,，即可進(jìn)行后續(xù)操作,。如果膠融解后溶液的顏色為桔紅色 或紫色，請(qǐng)使用10 μl 3M乙酸鈉(pH 5.0)將溶液的顏色調(diào)為黃色后再進(jìn)行后續(xù)操作,。

(溶液PC中含有pH指示劑,，當(dāng)pH≤7.5時(shí)溶液的顏色為黃色，此時(shí)DNA才能夠有效的與 膜結(jié)合,，當(dāng)pH值偏高時(shí)溶液的顏色變?yōu)榻奂t色和紫色,，需要進(jìn)行調(diào)整。)

4. 將上一 步所得溶液加入一個(gè)吸附柱CB2中( 吸附柱放入收集管中) ,12,000  rpm(~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱CB2放入收集管中,。

5. 向吸附柱CB2中加入600 μl漂洗液PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇) ,12.000  rpm (~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中,。

注意：如果回收的DNA是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn),，例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序，建議PW 加入后靜置2-5 min再離心,。

6. 重復(fù)操作步驟5

7. 將吸附柱CB2放入收集管中,，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,盡量除去漂洗液。將 吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘,，晾干,。

注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn),。

8. 將吸附柱CB2放入一個(gè)干凈離心管中,， 向吸附膜中間位置懸空滴加適量) 的洗脫緩沖液 EB,    (如果回收的目的片段>4 kb,則洗脫緩沖液EB應(yīng)置于65-70℃水浴預(yù)熱),室溫放 置2 min ,。12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,收集DNA溶液。

注意：洗脫液的體積不應(yīng)少于30  ,體積過少會(huì)影響回收的效率,。洗脫 液的pH值對(duì)于 洗脫效率有較大影響,。若后續(xù)做測(cè)序，需使用ddH2O做洗脫液,，并保證其pH值在7.0-8.5  范圍內(nèi),，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解,。為

1  了提高DNA的回收量,，可將離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中，室溫放置2 min, 12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,將DNA溶液收集到離心管中,。

二 ,、 從 P C R 反 應(yīng) 液 或 酶 切 反 應(yīng) 液 中 回 收 D N A

1. 柱平衡步驟：向吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中)加入500 μl的平衡液BL,12,000 rpm (~13,400×g )離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中,。(請(qǐng)使用 當(dāng)天處理過的柱子)

2. 估計(jì)PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積,，向其中加入等倍體積溶液PC,充分混勻(無需去 除石蠟油或礦物油)。

注意：對(duì)于回收<150 bp的小片段可將溶液PC的體積增加到3倍以提高回收率,；溶液混勻 后應(yīng)呈現(xiàn)黃色,，即可進(jìn)行后續(xù)操作。如果溶液的顏色為桔紅色或紫色,，請(qǐng)使用10 μl 3M乙 酸鈉(pH 5.0)將溶液的顏色調(diào)為黃色后再進(jìn)行后續(xù)操作,。

3. 將上 一 步所得溶液加入 一 個(gè)吸附柱CB2中(吸附柱放入收集管中),室溫放2 min, 12,000 rpm(~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中,。

注意：吸附柱容積為800 μl,若樣品體積大于800p可分批加入,。

4. 向吸附柱CB2中加入600 ul漂洗液PW (使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇) ,12.000   rpm (~13,400×g)離心1 min,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中,。

注意：如果純化的DNA是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn),，例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序，建議PW 加入后靜置2-5 min再離心,。

5. 重復(fù)操作步驟4.

6. 將吸附柱CB2放回收集管中,，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,盡量除去漂洗液。將 吸附柱CB2置于室溫放置數(shù)分鐘,，晾干,。

注意：漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn),。

7. 將吸附柱CB2放入一個(gè)干凈的離心管中,，向吸附膜中間位置懸空滴加適量的洗脫緩沖液

EB,(如果回收的目的片段>4 kb,則洗脫緩沖液EB應(yīng)置于65-70℃水浴預(yù)熱),室溫放

置2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min收集DNA溶液。

注意：洗脫液的體積不應(yīng)少于30  μl,體積過少會(huì)影響回收的效率,。洗脫液的pH值對(duì)于 洗脫效率有較大影響,。若后續(xù)做測(cè)序，需使用ddH?O做洗脫液,，并保證其pH值在7.0-

8.5范圍內(nèi),，且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。為了提高DNA的回收量,，可將 離心得到的溶液重新加回離心吸附柱中,，室溫放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)離  心2 min,將DNA溶液收集到離心管中。