高效液相色譜柱的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器,、泵、進(jìn)樣器,、色譜柱,、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。
色譜柱是高效液相色譜儀主要的部件,，被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定,，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此,，在日常工作中,，應(yīng)特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng)，以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,。
1,、使用預(yù)柱和保護(hù)柱。預(yù)柱安裝于泵和進(jìn)樣器之間,，它給色譜柱中的流動(dòng)相提供了平衡,，并防止了對(duì)柱填料有破壞作用的組分或污染物進(jìn)入色譜柱。保護(hù)柱(可以阻擋能夠牢固地吸附于色譜柱上的組分進(jìn)入色譜柱,，保護(hù)柱應(yīng)與色譜柱的填料相同,。預(yù)柱和保護(hù)柱可以經(jīng)常更換，而不需要經(jīng)常更換色譜柱,，這就延長(zhǎng)了色譜柱的使用壽命,。
2、防止氣體進(jìn)入色譜柱,。有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進(jìn)入的,，否則將會(huì)使柱效降低甚至形成微小的難以驅(qū)除的氣室。因此,，為了防止氣泡進(jìn)入色譜柱,，一定要使用經(jīng)過(guò)脫氣的流動(dòng)相，并且要嚴(yán)格按照下列步驟來(lái)安裝色譜柱,。
a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲,，觀察是否有溶劑滲出；
b.如有溶劑滲出,，即可將色譜柱接到管路上,，以避免氣泡的進(jìn)入；
c.如無(wú)溶劑滲出時(shí),，表明色譜柱的此端已經(jīng)進(jìn)去空氣了,，此時(shí)，可將色譜柱的出口端接到進(jìn)樣閥上,，以流動(dòng)相來(lái)反方向沖洗色譜柱,，以便將柱內(nèi)的空氣排除。以0.2ml/min的小流量來(lái)沖色譜柱,，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會(huì)導(dǎo)致柱性能的降低,；d.如果流出的溶劑里不含有氣泡，說(shuō)明柱內(nèi)的氣體已經(jīng)被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好,，這樣氣泡就進(jìn)不到色譜柱里面了,。
3、色譜柱的清洗,。為了不使被測(cè)物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中,，在每次的樣品分析工作完成之后，都應(yīng)及時(shí)地清洗色譜柱,。首先要用對(duì)被測(cè)樣品洗脫能力強(qiáng)的溶劑來(lái)洗脫色譜柱,，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì),，此時(shí)應(yīng)用100%的甲醇或使用異丙純,、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來(lái)，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可,。如果流動(dòng)相是緩沖溶液,，則應(yīng)先用蒸餾水來(lái)沖洗色譜柱，以沖掉柱內(nèi)的鹽,，然后再用合適的溶劑來(lái)沖洗,。
凝膠濾過(guò)色譜法中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動(dòng)相，用完之后當(dāng)然要用蒸餾水來(lái)沖洗,。如果是連續(xù)操作,，可以將緩沖溶液置于柱內(nèi)過(guò)夜，但是維持小流速(<0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出,，如果流動(dòng)相中含有鹵化物,，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈,，以防止它們對(duì)柱體的腐蝕,。
4、色譜柱的存放,。如果色譜柱暫時(shí)不用，存放時(shí)要注意以下幾點(diǎn)：
a.幾天之內(nèi)的短期放置,，應(yīng)先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來(lái)沖洗),，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
b.如果色譜柱不用,，僅用上述方法來(lái)處理就不行了,，這時(shí)應(yīng)使用色譜柱使用說(shuō)明書(shū)中所指明的溶劑來(lái)充滿色譜柱，反相柱一般使用甲醇,，正相柱則可用正已烷或庚烷,，而凝膠柱則不能用水了，因柱內(nèi)如果有微生物的生長(zhǎng)則會(huì)使柱效降低，此時(shí)應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來(lái)沖洗色譜柱,，再將色譜柱封嚴(yán),。色譜柱放置時(shí)，一定要將色譜柱的兩端封嚴(yán),，以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象,，因這可導(dǎo)致柱效的嚴(yán)重降低。
c.色譜柱應(yīng)貯存在室溫下,，如果放置于0℃以下的環(huán)境里,，柱內(nèi)就會(huì)結(jié)冰，這也將導(dǎo)致柱效的降低,。
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