1.2立方脈動滅菌箱0.8立方百萬級干熱滅菌柜

全自動環(huán)氧乙烷滅菌柜_EO氣體消毒

目的

測定環(huán)氧乙烷滅菌柜(下簡稱滅菌器) 對細菌芽孢的殺滅能力,，以驗證其滅菌性能是否符合原設計規(guī)定,。

試驗器材

(1) 枯草桿菌黑色變種( ATCC 9372 )芽孢菌片。

含菌量要求為5 ×10cfu/片～5 × 10cfu/片(按活菌培養(yǎng)計數(shù)結果計),。在環(huán)氧乙烷量為600mg/L±30mg/L,，溫度為54℃±2℃，相對濕度為60%±10% 條件下,，菌片上芽孢存活時間應≥7.8min,，殺滅時間≤58min，D值為2.6min～5.8min,。

(2) 染菌載體( 10mm × 10mm ,，以布片為代表，必要時可隨滅菌對象,，增用或改用其他載體,。

(3) 聚乙烯塑料袋( 封裝菌片用，大小為60mm× 40mm ,，厚0.2mm～0.4mm ),。

(4) 活菌培養(yǎng)計數(shù)所需器材(見2.1.1.3 )。

(5) 使用說明書中規(guī)定滅菌器可處理的物品(裝填滅菌器,，使達滿載要求),。

全自動環(huán)氧乙烷滅菌柜_EO氣體消毒

操作程序

(1) 根據(jù)試驗要求，制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片,。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內(nèi)密封包裝,，每袋2片。每次試驗用20袋,。

(2) 將滅菌器上,、中、下3層,，每層內(nèi),、中、外各設一點,，共設9點,。每點物品中間布放1袋，共需18袋試驗菌片,。另將一袋（2片）菌片放置在室溫條件下作為陽性對照,。

(3) 按使用說明書所規(guī)定的環(huán)氧乙烷濃度、作用時間,、柜內(nèi)的溫度和相對濕度,，在滿載條件下進行環(huán)氧乙烷滅菌處理,。滿載用物品，隨滅菌器用途而定,。處理完畢,，取出菌片，分別移種于5 ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,，置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),，7d后觀察結果(定性培養(yǎng)檢測)。

對難以判斷結果的營養(yǎng)肉湯管,，取其中0.2ml懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板,，用無菌L棒涂抹均勻，置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),。48h后涂片染色,，顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，或進一步做其他試驗,，判斷有無生長或生長的是否為試驗菌,。若為非試驗菌，則應重新進行試驗,。

(4) 測試中,，應同時設立定性和定量陽性對照組與陰性對照組。

(5) 定量陽性對照組,，以同批試驗用菌片置室溫下,，待消毒或滅菌試驗組達規(guī)定作用時間后，立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中,，各振敲打80次,。取洗液按2.1.1.3 所示方法進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。

(6) 定性陽性對照組,，以同批試驗用菌片置室溫下，待滅菌試驗組達規(guī)定作用時間后,，立即將該菌片2 片,，分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放入溫箱中作定性培養(yǎng),，觀察有細菌生長情況,。

(7) 陰性對照組，以同批次試驗用未染菌樣片2 片,，分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,，同時將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察有無細菌生長,。

(8) 試驗重復5 次,。

(9)在5次試驗中,，每次試驗中的陽性對照菌片，回收菌量均應在5×10cfu/片～5×10cfu/片,；定性陽性對照組,，細菌生長良好；陰性對照應無菌生長,。陽性或陰性對照若有不符合上述要求的結果,，試驗作廢，重新進行,。

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