基于康寧基質(zhì)膠的生物3D打印機(jī)
概述

康寧基質(zhì)基質(zhì)是一種富含細(xì)胞外基質(zhì)®蛋白的水凝膠。它提取自 Engelbreth-Holm-Swarm （EHS） 小鼠肉瘤,，其由層粘連蛋白,、IV 膠原、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖,、內(nèi)肌動蛋白/尼多原,、TGF-ß、表皮生長因子,、胰島素樣生長因子,、成纖維細(xì)胞生長因子、組織纖溶酶原激活劑和其他生長因子組成,。該協(xié)議將引導(dǎo)您完成使用康寧基質(zhì)膠進(jìn)行3D生物打印的分步過程,。

基于康寧基質(zhì)膠的生物3D打印機(jī)

概述

康寧基質(zhì)基質(zhì)是一種富含細(xì)胞外基質(zhì)®蛋白的水凝膠。它提取自 Engelbreth-Holm-Swarm （EHS） 小鼠肉瘤,，其由層粘連蛋白,、IV 膠原、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖,、內(nèi)肌動蛋白/尼多原,、TGF-?、表皮生長因子,、胰島素樣生長因子,、成纖維細(xì)胞生長因子、組織纖溶酶原激活劑和其他生長因子組成,。該協(xié)議將引導(dǎo)您完成使用康寧基質(zhì)膠進(jìn)行3D生物打印的分步過程,。

這種水凝膠已成功用于多種 3D 培養(yǎng)和組織工程應(yīng)用。現(xiàn)在,，它還可以在 平臺上用于 3D 生物打印具有多種細(xì)胞系的癌癥球體,。將 Matrigel 基質(zhì)與 3D 生物打印機(jī)相結(jié)合,，可以以標(biāo)準(zhǔn)化和可重復(fù)的方式實現(xiàn)球狀體和類器官的自動化生成。

儲存和處理

康寧基質(zhì)基質(zhì)應(yīng)儲存在 -20°C 下,。該協(xié)議已針對#354234高濃度基質(zhì)膠進(jìn)行了優(yōu)化,。其他 Matrigel 變體可能需要更新打印參數(shù)。

材料

1. 康寧 Matrigel 基底膜基質(zhì) （HC,， #354234）,， 10 mL 樣品瓶

2. 1 x 15 mL Falcon® 離心管

3. 1 x 5 mL 注射器

4. 1 x 注射器蓋

5. 1 x 全金屬 250 μm 噴嘴

6. 1 x Costar® 多孔板或 Falcon® 培養(yǎng)皿

7. 冰桶

8. 細(xì)胞

9. 細(xì)胞培養(yǎng)基

10. 孵化器

方法

1. 從-20°C中取出康寧基質(zhì)基質(zhì),，并在4°C的冰桶中解凍過夜;

2. 在 15 mL Falcon® 離心管中,，制備含有實驗所需適當(dāng)細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞沉淀;

• 注：我們建議使用 2 萬/mL 細(xì)胞濃度，并制備總共 5 mL 的細(xì)胞負(fù)載生物墨水,。在這種情況下,，您需要制備一個包含 3 萬個細(xì)胞的細(xì)胞沉淀,。

1. 將打印頭冷卻至4°C;

2. 將 打印床加熱至 37°C，然后插入您選擇的培養(yǎng)皿（蓋上蓋子）,，使其達(dá)到設(shè)定溫度;

3. 使用移液管,，向細(xì)胞沉淀中加入 3 mL（或所需體積）的 Matrigel®，并上下充分混合以確保細(xì)胞均勻性;

• 注意： 使用冰桶內(nèi)的管子執(zhí)行此步驟,，以防止過早交聯(lián),。

1. 從 5 mL 注射器中取出柱塞，并將注射器蓋放在魯爾鎖上;

2. 將冷藏的康寧Matrigel基質(zhì)細(xì)胞溶液移液到注射器筒中,，注射器蓋朝下;

3. 從注射器柱塞上取下黑色橡膠塞,，將其放入注射器筒的開口中;

4. 將注射器桶翻轉(zhuǎn)為面朝上，確保橡膠塞不會因固定到位而脫落;

5. 等待物料流到底部,，接觸橡膠塞;

6. 取下注射器蓋;

7. 用柱塞將材料向上推,，直到它在魯爾鎖針頭上形成彎月面;

• 注意： 執(zhí)行此步驟時，請防止柱塞重新連接到塞子上,。

1. 如果注射器中有氣泡,，請敲擊槍管以確保滯留的空氣流向表面;

2. 將250μm全金屬噴嘴連接到注射器上;

3. 將注射器放入生物打印頭中，確保盡量減少M(fèi)atrigel®暴露于室溫,，以避免過早交聯(lián);

4. 從下面的“打印設(shè)置"部分插入推薦的打印參數(shù)以打印您的類器官;

5. 注意：要操作液滴分辨率（直徑和體積）,，請查看 Printing Dots 協(xié)議;

6. 注意：由于表面受熱，Matrigel 液滴在打印過程中會部分交聯(lián),，但是,，請確保不要讓它們在表面上停留超過 15 分鐘。15分鐘后,，液滴將開始變干,，從而導(dǎo)致細(xì)胞活力降低,。

7. 將Matrigel基質(zhì)液滴板放入培養(yǎng)箱（37°C,，95%相對濕度，5%CO2） 30 分鐘;

8. 添加適量的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

注意：為了獲得佳打印效果,，建議不要進(jìn)一步稀釋基質(zhì),。如果您希望將更大體積的細(xì)胞與 ECM 混合，則提供 Cell-Bioink 混合方案,。它包含有關(guān)如何通過用載細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋來混合和制備載細(xì)胞的生物墨水的說明,。

注意： 查看我們的檢測方案，進(jìn)一步分析球狀體功能,。

打印設(shè)置

基于康寧基質(zhì)膠的生物3D打印機(jī)