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基于康寧基質膠的3D生物打印
閱讀：308 發(fā)布時間：2024-2-5概述
康寧基質基質是一種富含細胞外基質®蛋白的水凝膠,。®它提取自 Engelbreth-Holm-Swarm （EHS） 小鼠肉瘤，其由層粘連蛋白,、IV 膠原,、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、內肌動蛋白/尼多原,、TGF-?,、表皮生長因子、胰島素樣生長因子,、成纖維細胞生長因子,、組織纖溶酶原激活劑和其他生長因子組成。該協(xié)議將引導您完成使用康寧基質膠進行3D生物打印的分步過程,。
這種水凝膠已成功用于多種 3D 培養(yǎng)和組織工程應用?，F(xiàn)在，它還可以在 平臺上用于 3D 生物打印具有多種細胞系的癌癥球體,。將 Matrigel 基質與 3D 生物打印機相結合,，可以以標準化和可重復的方式實現(xiàn)球狀體和類器官的自動化生成。
儲存和處理
康寧基質基質應儲存在 -20°C 下,。該協(xié)議已針對#354234高濃度基質膠進行了優(yōu)化,。其他 Matrigel 變體可能需要更新打印參數(shù)。
材料
康寧 Matrigel 基底膜基質 （HC,， #354234）,， 10 mL 樣品瓶
1 x 15 mL Falcon® 離心管
1 x 5 mL 注射器
1 x 注射器蓋
1 x 全金屬 250 μm 噴嘴
1 x Costar® 多孔板或 Falcon® 培養(yǎng)皿
冰桶
細胞
細胞培養(yǎng)基
孵化器
方法
從-20°C中取出康寧基質基質,，并在4°C的冰桶中解凍過夜;
在 15 mL Falcon® 離心管中，制備含有實驗所需適當細胞數(shù)的細胞沉淀;
注：我們建議使用 2 萬/mL 細胞濃度,，并制備總共 5 mL 的細胞負載生物墨水,。在這種情況下，您需要制備一個包含 3 萬個細胞的細胞沉淀,。
將CORE™打印頭冷卻至4°C;
將 打印床加熱至 37°C,，然后插入您選擇的培養(yǎng)皿（蓋上蓋子），使其達到設定溫度;
使用移液管,，向細胞沉淀中加入 3 mL（或所需體積）的 Matrigel®,，并上下充分混合以確保細胞均勻性;
注意： 使用冰桶內的管子執(zhí)行此步驟，以防止過早交聯(lián),。
從 5 mL 注射器中取出柱塞,，并將注射器蓋放在魯爾鎖上;
將冷藏的康寧Matrigel基質細胞溶液移液到注射器筒中，注射器蓋朝下;
從注射器柱塞上取下黑色橡膠塞,，將其放入注射器筒的開口中;
將注射器桶翻轉為面朝上,，確保橡膠塞不會因固定到位而脫落;
等待物料流到底部，接觸橡膠塞;
取下注射器蓋;
用柱塞將材料向上推,，直到它在魯爾鎖針頭上形成彎月面;
注意： 執(zhí)行此步驟時,，請防止柱塞重新連接到塞子上。
如果注射器中有氣泡,，請敲擊槍管以確保滯留的空氣流向表面;
將250μm全金屬噴嘴連接到注射器上;
將注射器放入CORE™打印頭中,，確保盡量減少Matrigel®暴露于室溫，以避免過早交聯(lián);
從下面的“打印設置"部分插入推薦的打印參數(shù)以打印您的類器官;
注意：要操作液滴分辨率（直徑和體積）,，請查看 Printing Dots 協(xié)議;
注意：由于表面受熱,，Matrigel® 液滴在打印過程中會部分交聯(lián)，但是,，請確保不要讓它們在表面上停留超過 15 分鐘,。15分鐘后，液滴將開始變干,，從而導致細胞活力降低,。
將Matrigel基質液滴板放入培養(yǎng)箱（37°C，95%相對濕度,，5%CO2） 30 分鐘;
添加適量的培養(yǎng)基進行培養(yǎng),。
注意：為了獲得佳打印效果，建議不要進一步稀釋基質,。如果您希望將更大體積的細胞與 ECM 混合,，則提供 Cell-Bioink 混合方案。它包含有關如何通過用載細胞培養(yǎng)基稀釋來混合和制備載細胞的生物墨水的說明。
注意： 查看我們的檢測方案,，進一步分析球狀體功能,。
打印設置
