德國(guó)NACHT談離心機(jī)在實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用小常識(shí)
離心機(jī)在高速旋轉(zhuǎn)的過(guò)程中,,由離心力所導(dǎo)致的運(yùn)動(dòng)使懸浮于液體中的固體物質(zhì)形成沉淀,,也就是懸浮體液中質(zhì)量或體積較大的物體向轉(zhuǎn)頭半徑大的方向移動(dòng),,而質(zhì)量或體積較小的部分沉積在轉(zhuǎn)頭半徑較近的地方,。
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,,欲使沉淀與母液分開(kāi),,常使用過(guò)濾和離心兩種方法,。但在下述情況下,使用離心方法效果較好,。
1. 沉淀有粘性或母液粘稠,;
2. 沉淀顆粒小,容易透過(guò)濾紙,;
3. 沉淀量過(guò)多而疏松,;
4. 沉淀量很少,需要定量測(cè)定,,或母液量很少,,分離時(shí)應(yīng)減少損失;
5. 沉淀和母液必須迅速分開(kāi),;
6. 一般膠體溶液,。
1、電動(dòng)離心機(jī)的基本結(jié)構(gòu)和性能
普通(非冷凍)離心機(jī)
這類離心機(jī)結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單,,可分小型迷你離心機(jī)臺(tái)式和落地式兩類,,配有驅(qū)動(dòng)電機(jī)、調(diào)速器,、定時(shí)器等裝置,,操作方便。低速離心機(jī)其轉(zhuǎn)速一般不超過(guò)4000rpm,,臺(tái)式高速離心機(jī)大轉(zhuǎn)速可達(dá)18000rpm,。
低速冷凍離心機(jī)
轉(zhuǎn)速一般不超過(guò)4000rpm,大容量為2—4L,,是實(shí)驗(yàn)室常用于大量初級(jí)分離提取生物大分子,、沉淀物等。其轉(zhuǎn)頭多用鋁合金制的甩平式和角式兩種,,離心管有硬質(zhì)玻璃,、聚乙烯硬塑料和不銹鋼管多種型號(hào),。離心機(jī)裝配有驅(qū)動(dòng)電機(jī),、定時(shí)器、調(diào)整器(速度指示)和制冷系統(tǒng)(溫度可調(diào)范圍為-20—+40℃),可根據(jù)離心物質(zhì)所需,,更換不同容量和不同型號(hào)轉(zhuǎn)速的轉(zhuǎn)頭,。
高速冷凍離心機(jī)
轉(zhuǎn)速可達(dá)20000rpm以上,除具有低速冷凍離心機(jī)的性能和結(jié)構(gòu)外,,高速離心機(jī)所用角式轉(zhuǎn)頭均用鈦合金和鋁合金制成,。離心管為具蓋聚乙烯硬塑料制品。這類離心機(jī)多用于收集微生物,、細(xì)胞碎片,、細(xì)胞、大的細(xì)胞器,、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等,。
超速離心機(jī)
轉(zhuǎn)速可達(dá)50000rpm以上,能使亞細(xì)胞器分級(jí)分離,,并用于蛋白質(zhì),、核酸分子量的測(cè)定等。其轉(zhuǎn)頭為高強(qiáng)度鈦合金制成,,可根據(jù)需要更換不同容量和不同型號(hào)的轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)頭,。超速離心機(jī)驅(qū)動(dòng)電機(jī)有兩種,一種為調(diào)頻電機(jī)直接升速,,另一種為通過(guò)變速齒輪箱升速,。為了防止驅(qū)動(dòng)電機(jī)在高速運(yùn)轉(zhuǎn)中產(chǎn)熱,裝有冷卻驅(qū)動(dòng)電機(jī)系統(tǒng)(風(fēng)冷,、水冷),,限速器、記時(shí)器,、轉(zhuǎn)速記錄器等,。此外,超速離心機(jī)還裝配有抽真空系統(tǒng),。
2,、使用注意事項(xiàng)
1. 通常離心機(jī)都會(huì)有登記表,請(qǐng)?jiān)谑褂们按_實(shí)登記使用者,、轉(zhuǎn)陀,、轉(zhuǎn)速、時(shí)間,;
2. 離心管一定要平衡好,,放入離心陀時(shí)也要注意位置平衡。不要超過(guò)離心機(jī)或離心陀的高限轉(zhuǎn)速,;
3. 一定要在達(dá)到預(yù)設(shè)轉(zhuǎn)速后,,才能離開(kāi)離心機(jī),;若有任何異狀,要立刻停機(jī),;
4. 通常聽(tīng)聲音即可得知離心狀況是否正常,,也可注意離心機(jī)的震動(dòng)情形;
5. 使用硫酸銨等高鹽溶液樣本后,,一定要把離心陀洗干凈,,也要清理離心機(jī)轉(zhuǎn)艙;
6. 超高速離心機(jī)則因轉(zhuǎn)速*,,也更加復(fù)雜,,需要另外的專門(mén)訓(xùn)練才可使用。
3,、問(wèn)題與檢討
1. 高速以上的離心機(jī)為何要冷凍或者抽真空,?
2. 你已經(jīng)很小心地把兩只樣本離心管平衡好,但開(kāi)動(dòng)離心機(jī)后,,還是發(fā)生不平衡狀況,,停機(jī)后取出再秤一次,發(fā)現(xiàn)兩只離心管還是平衡的,,請(qǐng)問(wèn)為何會(huì)發(fā)生不平衡,?
3. 離心陀一般分成懸籃式swing bucket及角型angular兩大類,使用上有何差別,?
4. 一般論文中記載的離心條件,,有人記錄轉(zhuǎn)速如8,000rpm,有人記錄離心重力如10,000g,,二者有何不同,?何者較為適當(dāng)?
4,、使用步驟,,請(qǐng)養(yǎng)成登記習(xí)慣
(1) 設(shè)定使用溫度通常為4℃后,先把離心陀放入離心艙中,,注意離心陀要卡好軸心,;關(guān)上艙門(mén),離心艙的溫度開(kāi)始下降,,預(yù)冷時(shí)間要充足,。
(2) 把樣本裝入適當(dāng)?shù)碾x心管,雙雙用天平平衡重量,,蓋上離心管蓋子并旋緊,。
◆ 注意離心管只裝七成滿,雖然加有蓋子,,但也可能因離心力太強(qiáng)而外泄,。
◆ 大部分離心管都附有蓋子,,注意離心管的蓋子也要一起平衡。
◆ 離心管通常都會(huì)放在碎冰上,,注意取出平衡時(shí),要把碎冰的液體擦拭干凈,。
◆ 落單的離心管要用另一只裝有清水的離心管平衡,。
(3)把平衡好的離心管對(duì)稱地放入離心陀中,蓋上離心陀的蓋子,,注意有無(wú)旋緊,。
◆ 若離心陀的蓋子沒(méi)旋緊,離心時(shí)會(huì)掉出來(lái),,造成很大的傷害,!
(4)關(guān)上離心機(jī)艙門(mén),在儀表板上調(diào)好所要的轉(zhuǎn)速與時(shí)間,,例如8,000rpm/30min,。
◆ 注意所用轉(zhuǎn)速不能超過(guò)離心陀的限定,高轉(zhuǎn)速通常寫(xiě)在離心陀上面,,例如TGL-20M的高轉(zhuǎn)速為20,000rpm,,但若離心機(jī)太老舊,必須往下調(diào)降,。
◆ 轉(zhuǎn)速與時(shí)間設(shè)定盡量不要太高,,例如能使用7,000rpm者就不要用8,000rpm。
(5) 確定所有步驟無(wú)誤后,,按Start鈕開(kāi)動(dòng),,離心機(jī)漸漸加速,此時(shí)要密切監(jiān)控,。
◆ 有些老式的時(shí)間轉(zhuǎn)鈕,,設(shè)定5min以下時(shí),要先轉(zhuǎn)過(guò)10min再轉(zhuǎn)回5min,。
◆ 按Start的按鈕時(shí),,按住時(shí)間不能太短,請(qǐng)持續(xù)按約一秒鐘后才松開(kāi),。
◆ 開(kāi)始加速的時(shí)候危險(xiǎn),,若發(fā)現(xiàn)聲音不對(duì),或產(chǎn)生大震動(dòng),,請(qǐng)立刻按Stop,。
(6) 等到離心達(dá)到所要的轉(zhuǎn)速后,確定一切正常才可離去,。
(7) 完成離心時(shí),,要等離心陀*靜止后,,才能打開(kāi)艙門(mén);請(qǐng)盡快取出離心管,,先觀察離心管是否*,,以及沉淀的位置,盡速把上清倒出,,小心不要把沉淀弄混濁,。
◆ 不管所要的是上清或沉淀,請(qǐng)取用干凈的燒杯收集上清,,以免有失誤,。
◆ 傾倒上清要很小心,以免把沉淀一起倒出來(lái),;若不慎混在一起,,就要重來(lái)一次。
◆ 若離心管有漏,,要找出原因,,并且立刻清理離心陀或離心艙。
(8) 在兩次離心之間的空檔,,不需取出離心陀,,但蓋上艙門(mén),勿讓熱空氣流入離心艙,。
(9) 全部使用完畢后,,取出離心陀清理,可以用自來(lái)水沖洗,,并且倒放晾干,。離心艙門(mén)要打開(kāi),等結(jié)冰融化后,,再稍加擦拭及清理,,若有液體漏出,要用清水洗之,。也要回頭檢查平衡離心管的天平以及桌面,,很容易弄臟,要仔細(xì)清理干凈才離開(kāi),。
實(shí)驗(yàn)室常用電動(dòng)離心機(jī)有低速,、高速離心機(jī)和低速、高速冷凍離心機(jī),,以及超速分析,、制備兩用冷凍離心機(jī)等多種型號(hào)。其中以低速(包括大容量)離心機(jī)和高速冷凍離心機(jī)應(yīng)用為廣泛,,是生化實(shí)驗(yàn)室用來(lái)分離制備生物大分子*的重要工具,。
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