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養(yǎng)殖場用非洲豬瘟檢測試劑盒使用時應(yīng)該注意什么
養(yǎng)殖場用非洲豬瘟檢測試劑盒使用時應(yīng)該注意什么,？【競道廠家發(fā)布】How to use African classical swine fever detection kit for farms 型號：JD-ZWSJ2
試劑盒組成及貯藏條件
名稱20 T50 T
1、吸附柱20個50個
2,、收集管20個50個
3、裂解液5 mL11 mL
4,、洗液I13 mL32 mL
5,洗液II13 mL32 mL
6.洗脫液1.2 mL3 mL
2,、 保存條件及有效期：室溫下保存，有效期12個月.
3,、 需自備材料：無水乙醇,、1.5 mL無菌離心管、1.5 mL無菌離心管(長臂型),、生理鹽水,、研缽、無菌
1mL, 2OOuL,、10uL槍頭,、記號筆等。
【操作步驟】
一,、樣品制備
1,、 血液樣品：抗凝血樣品置離心管中，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,，取上層血漿;非抗凝血樣品置離心 管中,，待凝固后，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,，取上層血清,，置于滅菌離心管中，編號待檢,。
2,、 組織樣品：采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié),、扁桃體等病變組織樣品0.1g.組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨，加入1 mL生理鹽水混勻,，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,，取上清于滅菌離心骨中，編號待檢,。
3,、 口腔液：進食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉線綁紗布團吸引動物咀嚼，收集口腔液大于 500uL,， 8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,，取上清于滅菌離心管中，編號待檢,。
4,、 飼料：取適量研磨后的飼料(約0.2g)，放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP 管屮,，振蕩混勻,，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，取上清于滅菌離心管中,編號待檢.
5,、 灰塵：用無菌棉簽蘸取適量環(huán)境表面上的灰塵,，放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP管中，振蕩混勻,，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,，取上清于滅菌離心管中，編號待檢,。
二,、DNA的提取
1、取裂解液200uL加入無核酸酶1.5 mL離心曾屮,，分別加入血漿/血清/組織液等樣品液200uL. 震蕩混勻10秒或顛倒混勻10次,，室溫放置5分鐘(如果室內(nèi)溫度較低時.需放置25C水浴溫育)，再加入200uL無水乙醇,，顛倒混勻10秒;若樣品渾濁則先12000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘處理,，取上清液，以避免堵塞柱子;
2,、 將液體轉(zhuǎn)入套有收集管的吸附柱中,， 12000rpm離心1分鐘：
3、 棄收集管液體,，向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm離心1分鐘;
4,、 棄收集管液體，向吸附柱中加600uL洗液II,， 12000 rpm離心I分鐘;
5,、 棄收集管液體,，12000 rpm離心2分鐘，以*去除殘留洗液;
6,、將吸附柱轉(zhuǎn)入新的無核酸酸1.5mLEP管(長臂型)中,，向柱中央滴加50 uL洗脫液，靜置1分鐘, 12000 rpm離心1分鐘,，EP管中液體即為病毒DNA,。
【注意事項】
1、 實驗前諾仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書,，嚴(yán)格按照操作步驟執(zhí)行.在操作過程中對時間,、試劑體積等 粘確控制可以獲得好的結(jié)果。
2, 樣本應(yīng)新鮮采集使用,，或低溫運輸儲存;
3, 樣本具有潛在感染風(fēng)險,，核酸的提取應(yīng)在核酸提取實驗室的生物安全柜中進行。
4,、 核酸提取冇關(guān)耗材確保高溫滅菌,，提取后核酸盡快進入下一步試驗或冷凍保存待用。
5, 試劑使用前應(yīng)混合均勻,，試劑具有一定腐蝕性,，使用時請戴手套、口罩做好防護,。
6. 低溫下裂解液出現(xiàn)結(jié)晶數(shù)屬正?，F(xiàn)象，可在60°C水浴加熱助溶后使用,。
7,、 實驗產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)及時收集，遠(yuǎn)離PCR實驗室進行無害化處理,。
僅供獸醫(yī)診斷使用