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蘇州千舍生物科技有限公司

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Mahlavu 人肝癌細胞

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所在地蘇州市

更新時間:2023-12-22 13:53:58瀏覽次數(shù):1525次

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HFL1人胚肺成纖維細胞
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Mahlavu 人肝癌細胞

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細胞特性

1) 來源:人 肝組織

2) 形態(tài):上皮細胞樣  貼壁生長

3) 含量:>1x10^6  細胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)用途:僅供科研使用,。

 

運輸和保存:干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,,請立即與我們聯(lián)系,。

(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

 

細胞接收后的處理

 

1)收到細胞后,,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,,請拍照后及時聯(lián)系我們。

 

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),,同時給剛收到的細胞拍照(10×,,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

 

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完quan培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上,,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。

 

4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完quan培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,。               

 

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

 

1) 準備DMEM 培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,;雙抗,1%,。

 

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

 

3) 凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。

 

二. 細胞處理:

 

1) 凍存細胞的復(fù)蘇:

 

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入到含4-6mL完quan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,完quan培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。

 

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。

 

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

 

1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

 

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白mei-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。

 

3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完quan培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

 

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。

 

下面T25瓶為例,;

 

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),,來決定細胞的凍存密度,。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml.

 

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱,、代數(shù),、日期等信息。

 

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,,-80度冰箱中過夜,,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

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人非小細胞肺腺癌細胞 NCI-H157

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人肝膽管癌細胞 RBE

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142140210 SW620/5FU

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