非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞COS-1

DMEM(含NAHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S

貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞死亡及生長(zhǎng)異常

1,、首先講一下細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的原因：

a)更換了血清或者培養(yǎng)基,，細(xì)胞需要一段時(shí)間適應(yīng)一下；

b)由于細(xì)胞的特殊種類,，培養(yǎng)基中缺少某些生長(zhǎng)因子,；

c)培養(yǎng)基中有少量真菌或者細(xì)菌污染；

d)傳代的時(shí)候細(xì)胞密度過(guò)低,；

e)細(xì)胞狀態(tài)老化,；

f)支原體污染。

2,、解決上述問(wèn)題的方法：

a)如果實(shí)驗(yàn)室沒有某種細(xì)胞最適宜的培養(yǎng)基,，可以先用原培養(yǎng)條件凍存一些，然后逐漸增加新的培養(yǎng)基比例,，25%,、50%、75%到100%，傳代3-5次后,，讓細(xì)胞慢慢適應(yīng),。

b)判斷是不是培養(yǎng)基發(fā)生污染，可以先不加抗生素,，觀察細(xì)胞狀態(tài),。

c)增加細(xì)胞的接種密度。

d)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞老化的時(shí)候,，及時(shí)更換新的細(xì)胞,。

e)如果懷疑是支原體污染，一定要隔離疑似污染的培養(yǎng)皿,，及時(shí)清潔消毒孵箱,。

3、造成細(xì)胞死亡的原因：

a)細(xì)胞消化過(guò)度,；

b)沒有及時(shí)換液,，營(yíng)養(yǎng)成分消耗殆盡；

c)如果前一天細(xì)胞的狀態(tài)很好,，換液之后就全死了,，應(yīng)該考慮是否是培養(yǎng)基或者血清的問(wèn)題。

4,、如何判定細(xì)胞是否發(fā)生支原體污染：可以選用直接培養(yǎng)法,、熒光染色或PCR方法檢測(cè)，比較常用的是PCR,。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生支原體污染時(shí),，原則上是能夠去除支原體的，但是整個(gè)過(guò)程耗時(shí)耗力,，還要考驗(yàn)個(gè)人操作能力,。所以如果不是處于細(xì)胞存量很少的情況下，建議發(fā)現(xiàn)污染時(shí)立刻棄掉,，重新培養(yǎng),。

5、如果孵箱中只是某種細(xì)胞持續(xù)性大量死亡,，而其他細(xì)胞狀態(tài)都沒問(wèn)題的話,，基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細(xì)胞的真菌或細(xì)菌，遇到這種情況,，小六兒也不知道該怎么做,，只能是先停一段時(shí)間看看。,。,。,。。,。

5,、其他注意事項(xiàng)：每個(gè)星期都要更換孵箱底盤中的水（紫外照射后超純水）；每?jī)芍芟疽淮畏跸洌?/span>75%酒精擦拭一遍后,，再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍（都用超純水配制）,；可以在孵箱底部放一個(gè)燒杯,，里面放入飽和硫酸銅,，可以抑制霉菌生長(zhǎng)。不過(guò)也有人說(shuō)硫酸銅會(huì)改變孵箱的PH值,，如果不是孵箱污染的情況很嚴(yán)重,，建議不要使用。

人膽囊上皮細(xì)胞永生化

人膽囊上皮細(xì)胞永生化+GFP

人前庭鞘膜瘤細(xì)胞永生化

人胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞永生化

人胰腺癌細(xì)胞永生化

人胰腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞永生化

人風(fēng)濕性關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞永生化

人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化

人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化

人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞永生化

人腸癌細(xì)胞永生化

人頸靜脈球瘤細(xì)胞永生化

人副神經(jīng)節(jié)瘤細(xì)胞永生化

人腸息肉上皮細(xì)胞永生化

人原代聽神經(jīng)瘤細(xì)胞永生化

人原代髓核細(xì)胞永生化

人原代神經(jīng)鞘膜瘤細(xì)胞永生化

人胰腺腫瘤成纖維細(xì)胞永生化

人眼瞼皮脂腺癌細(xì)胞永生化

人主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞永生化

人睪丸支持細(xì)胞永生化

人骨骼肌細(xì)胞永生化

人卵巢癌細(xì)胞永生化

人真皮成纖維細(xì)胞永生化

人原代甲狀旁腺主細(xì)胞永生化

人原代乳腺上皮細(xì)胞永生化

人原代乳腺癌成纖維細(xì)胞永生化

人原代軟骨細(xì)胞永生化

人臍靜脈內(nèi)皮原代細(xì)胞+GFP 原代細(xì)胞+GFP

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型

小鼠肺成纖維細(xì)胞永生化

小鼠附睪脂肪干細(xì)胞永生化

小鼠腎小球系膜細(xì)胞永生化

小鼠胰腺星狀細(xì)胞永生化

小鼠脂肪干細(xì)胞永生化

麝香鼠原代乳腺上皮細(xì)胞永生化

小鼠骨髓巨噬細(xì)胞永生化

小鼠角膜上皮細(xì)胞永生化

非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞COS-1

細(xì)胞復(fù)蘇

細(xì)胞復(fù)蘇和凍存講究“慢凍快溶",，復(fù)蘇時(shí)一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細(xì)胞凍存液快速融化至37℃,，使胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,，對(duì)細(xì)胞造成損害,。

復(fù)蘇準(zhǔn)備

?打開水浴鍋加熱至37℃。

? 超凈臺(tái)上放好離心管（一般15ml的）,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，移液管，紫外滅菌至少20至30分鐘,，吹風(fēng)5至10分鐘除去臭氧,。

?37℃預(yù)熱好要復(fù)蘇細(xì)胞的培養(yǎng)液，也可以不用預(yù)熱培養(yǎng)液,，根據(jù)細(xì)胞情況選擇,。

?向離心管中加約5至10ml培養(yǎng)液，從液氮罐或-80℃中取出凍存細(xì)胞,，立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動(dòng),，待融化后（約2min即可）立即將解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含培養(yǎng)液的離心管中，800-1000rpm下離心5min,，棄上清,，加適量*培養(yǎng)液輕輕吹打重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，輕晃使瓶底液體分散均勻,，標(biāo)好細(xì)胞名稱,、代數(shù)、復(fù)蘇日期,，顯微鏡下觀察后放入37℃,，5%CO2培養(yǎng)箱中,。一般貼壁細(xì)胞過(guò)夜即可貼壁，換液和傳代時(shí)間根據(jù)不同細(xì)胞生長(zhǎng)情況而定,。

細(xì)胞復(fù)蘇注意事項(xiàng)

?復(fù)蘇時(shí)動(dòng)作要快,，盡量減少胞內(nèi)形成冰晶，影響復(fù)蘇后細(xì)胞活率,。

? 融化時(shí)盡量不要碰到管口,，以免容易造成污染。

?若一次性需要復(fù)蘇細(xì)胞很多,，可以分批水浴解凍,，防止傳熱不佳使得細(xì)胞融化時(shí)間延長(zhǎng)。

?若需要同時(shí)復(fù)蘇好幾種細(xì)胞,，提前在離心管和培養(yǎng)瓶上做好標(biāo)記,，或記住自己擺放的位置，不要弄混亂,。