F8687胎牛血清

貨號：F8687

規(guī)格：500ml

1、一般拿到細(xì)胞后,，應(yīng)該注意什么?

收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒,，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張),，排除細(xì)胞本身污染的情況,。

2、何時(shí)須更換培養(yǎng)基?

視細(xì)胞生長密度而定,，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好?

一般情況下細(xì)胞生長至*匯合后就應(yīng)該傳代,，所有細(xì)胞生長都有一個(gè)要求不宜生長過密(也就是常說的長老了),，但有接觸抑制的細(xì)胞，在匯合前就必須進(jìn)行傳代,，這類細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代,，否則會引起細(xì)胞分化。

4,、貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代?

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基,，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細(xì)胞,，顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙明顯,，部分細(xì)胞剛開始脫離瓶壁,，加4 ml左右*培養(yǎng)液混勻終止消化，將細(xì)胞小心吹打下來,，1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清,，細(xì)胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:2-1:3,，1:3-1:6,，1:6-1:8)，每T25瓶補(bǔ)足培養(yǎng)基至5-6 ml,，37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng)。

5,、懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何傳代處理?

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,，稀釋細(xì)胞濃度即可,，若培養(yǎng)液太多時(shí)，將細(xì)胞懸液移入離心管中,，1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清,，細(xì)胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸,，按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加*培養(yǎng)液至4-5 ml,，37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)生長,，此時(shí)細(xì)胞生長狀態(tài)良好,，當(dāng)補(bǔ)液時(shí)，需避免反復(fù)吹打,。

6,、貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶?

一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過高時(shí),，易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多,，黑渣子增多，常規(guī)細(xì)胞傳代時(shí)建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化,，對于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化,，細(xì)胞密度過高超過80%時(shí)，采用分步消化法,。胰酶儲存在–20°C,，解凍在4°C進(jìn)行，第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中,，保存于–20°C,，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機(jī)會,。

7,、如何控制胰酶消化時(shí)間?

胰酶消化的程度是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個(gè)關(guān)鍵步驟：消化過度細(xì)胞碎片增多，黑渣子增多,，細(xì)胞會成片脫落,，嚴(yán)重影響細(xì)胞活性，并有部分細(xì)胞漂浮,，隨棄去的胰酶流失;消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下,，反復(fù)吹打同樣也會損傷細(xì)胞活性。

不同細(xì)胞對消化液的敏感性不同,，胰酶消化的時(shí)間也會有差異,。胰酶消化時(shí)間與胰酶的濃度,，是否含EDTA，胰酶的儲存時(shí)間,，胰酶的儲存溫度,，是否反復(fù)凍融，消化加入的胰酶體積,，消化溫度及細(xì)胞的密度有關(guān),。消化對于新購買的細(xì)胞，建議客戶先用低濃度的胰酶仔細(xì)去摸索一下消化時(shí)間,，可每隔1分鐘鏡下觀察細(xì)胞是否變圓,，記錄最佳消化時(shí)間，下一次操作參考之前的記錄來控制時(shí)間即可,。

8,、細(xì)胞離心下來的離心速率應(yīng)為多少?

細(xì)胞傳代或凍存時(shí)欲回收細(xì)胞，其離心速度一般為800-1000 rpm/min,，室溫離心5-8分鐘,，轉(zhuǎn)速過高，將造成細(xì)胞破裂死亡,。

因此選擇正確的,，靠譜的胎牛血清及廠家極其重要↓↓↓↓

→→→→蘇州千舍生物，進(jìn)口胎牛血清,，搬運(yùn)工←←←←←←

相關(guān)血清：F2442 500ml  （美國源）

         F8687 500ml  （澳洲源）

         H4522 100ml  （科研人AB血清）

9,、如何區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞?

顯微鏡下觀察：活細(xì)胞中間透亮，飽滿,，有光澤,，死細(xì)胞較暗。也可以通過臺盼藍(lán)染色來計(jì)算細(xì)胞活力,。

10,、如何用臺盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞?

用無血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200～2000 個(gè)/毫升，在0.1 毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺盼蘭溶液,。輕輕混勻,，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞?；罴?xì)胞排斥臺盼蘭,，因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞，注意計(jì)數(shù)需在加入臺盼藍(lán)10min內(nèi)完成,。有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的,，可直接用計(jì)數(shù)儀進(jìn)行。

11,、二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎?

二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性,。

12,、使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?

EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性,。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前,，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子,。

13,、可否使用與原先不同的培養(yǎng)基?

不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基,，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無法立即適應(yīng),，易造成細(xì)胞狀態(tài)不好,，最終造成細(xì)胞無法存活。

14,、可否使用與原先不同的血清種類?

不能,。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響,。來自不同物種的血清,，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會造成細(xì)胞無法存活,。

15,、細(xì)胞為何生長不均勻?

細(xì)胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時(shí)搖勻,，但在細(xì)胞貼壁前,，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少,，培養(yǎng)箱擱板表面不平整,，這些因素會導(dǎo)致細(xì)胞生長不均勻。

16,、購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳

研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳,。運(yùn)輸過程對細(xì)胞有嚴(yán)重影響,。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后,，加以洗滌細(xì)胞和離心,。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤,。細(xì)胞置于–80°C太久,。

人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC

人肝癌細(xì)胞 smmc-7721

人腦膠質(zhì)瘤 SNB-19

人肝癌細(xì)胞 snu-1

人肝癌細(xì)胞 Snu-182

人膀胱上皮永生化細(xì)胞 sv-huc-1

人滑膜肉瘤細(xì)胞 SW982 [SW-982]

人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW1116

人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW-13

人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW1353

人胰腺癌細(xì)胞 SW1990

人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW480

人甲狀腺癌細(xì)胞 SW579

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 SW620

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+GFP SW620+GFP

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株 SW620/5FU

人膀胱移行細(xì)胞癌 SW780

人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 T24

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 T47D

人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 T98G

人食管癌細(xì)胞 TE-1

人食管癌細(xì)胞 TE-12

人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞 thp-1

人腦膠質(zhì)瘤 TJ905

人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞株 TPC-1

人甲狀腺癌細(xì)胞 TT

人喉癌細(xì)胞 TU212

人喉癌細(xì)胞 TU-138

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U118MG（U-118MG）

人成骨肉瘤細(xì)胞 U-2 OS

人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 U251 MG (KO)

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞 U251 MG/TMZ

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)

人骨髓瘤細(xì)胞 U266

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U87MG

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP U87MG+RFP

人淋巴瘤細(xì)胞 U-937

人膀胱移行細(xì)胞癌 UM-UC-3

人前列腺癌細(xì)胞 VCAP

人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 WERI-RB-1

人黑素瘤細(xì)胞 WM-115

人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞 WPMY-1

人正常肝細(xì)胞 WRL68

云南宣威人肺腺癌細(xì)胞系+GFP XWLC-05+GFP

人膽囊癌細(xì)胞系 ZJU-0430

人膽囊癌細(xì)胞系熒光素酶標(biāo)記 ZJU-0430+LUC

人乳腺癌細(xì)胞 ZR-75-1

17,、細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理?

一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長是正常現(xiàn)象,，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下,，很可能會出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物,，殃及周圍的懸浮細(xì)胞,，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán),，可以通過細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán),，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右,，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán)),。

18、細(xì)胞內(nèi)有空泡,，是否是正?，F(xiàn)象?

部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等),，這個(gè)是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡,，則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳,，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化,，控制傳代比例及時(shí)間等方法來調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡,，且單個(gè)細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細(xì)胞代次較高,，細(xì)胞老化所致,，需更換代次較早的細(xì)胞。

19,、細(xì)胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度,，對細(xì)胞有嚴(yán)重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細(xì)胞，傳代太稀;或者生長較快的細(xì)胞,，傳代較密,，細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長)。

20,、細(xì)胞生長逐漸變慢是什么原因?

細(xì)胞增殖變慢有以下原因：1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細(xì)胞營養(yǎng)不良 4.細(xì)胞頻繁傳代 5.細(xì)胞狀態(tài)不佳或老化 6.細(xì)胞存在污染,。

21、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%或10%CO2?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度,。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時(shí),，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10% CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時(shí)，則應(yīng)使用5% CO2培養(yǎng)細(xì)胞,。

22,、CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子,，水盤中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染,。

23、細(xì)胞接種密度多少合適?

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可,。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長的一個(gè)重要原因,。按照我們的經(jīng)驗(yàn)：一般倍增時(shí)間24 h內(nèi)的細(xì)胞，傳代比率1:6-1:12為宜,，倍增時(shí)間24-48 h的細(xì)胞,，傳代比率1:3-1:8為宜，倍增時(shí)間超過48h的細(xì)胞, 傳代比率1:2-1:4為宜,。

24、培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn),，是污染嗎?

首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁,，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則,，是否運(yùn)動,，是做布朗運(yùn)動還是呈直線型快速移動。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則,，做布朗運(yùn)動,，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的,，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,。如果黑點(diǎn)大小一致，快速移動,，很可能是細(xì)菌污染,。

25、如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的產(chǎn)生?

掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī),，不要細(xì)胞長老了再傳代;掌握好消化時(shí)間,，防止消化過度產(chǎn)生細(xì)胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳;嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。

26,、黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了,，如何進(jìn)行處理?

如果判定黑點(diǎn)是污染，請及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄,。其他情況,，可參照以下進(jìn)行：

如果是懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞上清慢速離心(500-600 rpm/min,，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS洗2-3遍，洗的時(shí)候,，輕輕拍打培養(yǎng)瓶,，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS,，消化時(shí)先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右,，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶,，然后正常消化細(xì)胞,，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶,，并可以嘗試適當(dāng)增加血清濃度進(jìn)行培養(yǎng),。

27、培養(yǎng)用dish,flask是否相同,？

不同廠牌的dish或flask,，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同,，雖對大部分細(xì)胞沒有太大之影響,，惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠牌不同之dish或flask而有顯著之生長差異。

F8687胎牛血清|澳洲胎牛血清|干細(xì)胞胎牛血清|特級胎牛血清|新西蘭胎牛血清價(jià)格|新西蘭胎牛血清說明書......