大鼠DNA甲基轉移酶(DNMT)ELISA試劑盒蘇州千舍生物為您傾情供應,成熟技術,,嚴格工藝流程,,*抗體/抗原,嚴格QC檢測后方可出庫,,請放心購買,!
大鼠DNA甲基轉移酶(DNMT)ELISA試劑盒操作注意事項
1)試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,,不可保存。
2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質。
3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標板時應充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7)底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
8)加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9)按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。
大鼠DNA甲基轉移酶(DNMT)ELISA試劑盒樣品收集,、處理及保存方法
1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,,應將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
大鼠DNA甲基轉移酶(DNMT)ELISA試劑盒操作步驟
1)使用前,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差,。
2)根據待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數(shù)量來定,,能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內,。
3)加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內,。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時,。
4)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。
6)甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
7)每孔加入底物A,、B各50ul,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8)取出酶標板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應立即測定結果。
9)在450nm波長處測定各孔的OD值,。
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