產(chǎn)品名稱：A549/吉西他濱 人肺癌吉西他濱耐藥株
種屬：人
組織來源：肺癌
生長形態(tài)：貼壁生長
形態(tài)特征：上皮細(xì)胞
支原體檢測：陰性
細(xì)胞背景：該細(xì)胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系,，患者為58歲人男性,。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂,。
培養(yǎng)條件：90%RPMI—1640+10%胎牛血清+100nN吉西他濱
細(xì)胞復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)中繞不過去的基礎(chǔ)操作,，涉及到將液氮冷凍保存的細(xì)胞恢復(fù)到適宜的生長狀態(tài),。
（1）復(fù)蘇前將生物安全柜或者超凈工作臺進(jìn)行紫外滅菌30 min,。并將含有10% FBS,、1×青鏈霉素（100×）等的培養(yǎng)基,、無菌1×PBS（pH 7.2~7.4）進(jìn)行37℃預(yù)熱。（2）將預(yù)熱好的培養(yǎng)基提前加入到10 cm培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,，并取4 mL培養(yǎng)基加入到15 mL離心管中,。（3）從液氮罐中取出細(xì)胞凍存管，應(yīng)帶有防護眼睛和手套,。迅速放入盛有37℃的水浴中,，并不時搖動，盡快解凍,。（4）肉眼觀察全部化凍后,，將細(xì)胞加入到提前準(zhǔn)備好的含有4 mL培養(yǎng)基的15 mL離心管中，并以1000 rpm,，離心5 min,。用75%酒精擦拭消毒后，移至超凈工作臺上,，去除上清,，迅速加入1 mL步驟（1）中的培養(yǎng)基，輕輕吹打重懸細(xì)胞,，然后將細(xì)胞全部轉(zhuǎn)移至10 cm培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,。（5）以上下、左右各輕輕晃動5~10次,，進(jìn)行“十"字法混勻細(xì)胞,，放置37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中。（6）次日更換一次培養(yǎng)液,，觀察細(xì)胞狀態(tài),，再繼續(xù)培養(yǎng)。（1）快速解凍：從液氮取出細(xì)胞凍存管后,，應(yīng)立即放入37℃水浴鍋中,，持續(xù)搖晃1~2 min直至解凍，以避免細(xì)胞死亡,。（2）稀釋冷凍保護劑：解凍后可用培養(yǎng)基稀釋含有冷凍保護劑（如DMSO）的細(xì)胞懸液,，以減少其對細(xì)胞的毒性。（3）輕柔處理細(xì)胞：在離心和重懸細(xì)胞時,，應(yīng)避免劇烈攪拌或離心,，以免損傷細(xì)胞。（4）及時換液：復(fù)蘇后的細(xì)胞應(yīng)及時換液,，一般在12~24 h換液,，去除死細(xì)胞和代謝廢物，為細(xì)胞提供新鮮的營養(yǎng)物質(zhì)。（5）使用優(yōu)質(zhì)血清：血清的質(zhì)量對細(xì)胞復(fù)蘇和生長至關(guān)重要,，選擇內(nèi)毒素更低,、質(zhì)量穩(wěn)定的血清可以提高實驗成功率。
