細胞名稱：C6+luc 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞熒光素酶標記

貨號：WS-0088（STR（C6鑒定））

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞介紹

膠質(zhì)細胞株C6是由Benda等用N-nitrosomethylurea誘導的大鼠膠質(zhì)瘤克隆,，并經(jīng)過一系列的體外培養(yǎng)和動物傳代交替后建成的,。當細胞從低密度生長到滿瓶時，S-100產(chǎn)量增加10倍。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

一、細胞特性

1） 來源：大鼠,，膠質(zhì)瘤

2）形態(tài)：成纖維樣 貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二,、細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細胞,，隨細胞傳代次數(shù)的增加,，其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選,。        

建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選,。

初次進行細胞篩選時,，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細胞漂浮或者漂浮較少,，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml,。若篩選過程中,，漂浮細胞大于60%，則停止篩選,，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),，至細胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選,。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,，可停止篩選，用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng),。

三,、運輸和保存 

干冰運輸及復蘇好存活細胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯(lián)系,。 

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。 

四,、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備 

1） 準備F12K 培養(yǎng)基  81.5 %；優(yōu)質(zhì)胎牛血清2.5 %,；馬血清（國產(chǎn)）15 %,；P/S青霉素-鏈霉素1 %,。                                                            

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注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準?。。,?！

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

四,、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況,。

（一）如果細胞未長滿,，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作,，打開細胞培養(yǎng)瓶,，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng),。

(二)如果細胞已長滿,，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液,，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次,。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁,，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察,，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上培養(yǎng)基中止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中,。如果沒有特別說明,，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1,、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，否則不能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下,。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素,。

3,、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落,，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi),。

4、收到細胞后,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯(lián)系,。