養(yǎng)細(xì)胞的寶子們,，收到細(xì)胞后先別著急處理細(xì)胞，花5分鐘仔細(xì)閱讀....

1,、對于復(fù)蘇細(xì)胞

① 請按照說明書提前準(zhǔn)備好基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清,、因子,、胰酶、雙抗，不要隨意更改培養(yǎng)條件,，提前將生物安全柜進(jìn)行酒精消毒和紫外滅菌,。

② 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、漏液,、培養(yǎng)基渾濁或污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

③ 細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3小時,，在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，給細(xì)胞（100倍×2張,，200倍×2張）以及培養(yǎng)瓶（外觀×1張）拍照留存,，售后時肯定需要提供。

④ 瓶內(nèi)充液培養(yǎng)基（運輸培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，需按照說明書上的培養(yǎng)條件配制新鮮wan全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,。

⑤ 鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，收集全部充液培養(yǎng)基,，250g離心5分鐘,，棄去培養(yǎng)瓶中充液培養(yǎng)基，用新鮮配制的wan全培養(yǎng)基重懸未貼壁的細(xì)胞,，將細(xì)胞鋪瓶至新的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，補齊wan全培養(yǎng)基至6mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,，立刻對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。

注：在快遞運送過程中細(xì)胞因振動會造成脫落現(xiàn)象,，不論繼續(xù)培養(yǎng)還是傳代,，未貼壁的細(xì)胞均需離心回收。

⑥ 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,，保種1支,，另外1支傳代至T25新瓶，前3代建議均采用1:2傳代,，若細(xì)胞明顯達(dá)到對數(shù)期,，1:2傳代后第二天就長滿，則可提高傳代比例,，采用1:3傳代,，前面代次建議代代保種，以妨出現(xiàn)問題后無種可用,。

⑦ 由于細(xì)胞在運輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時間顛簸,，收到細(xì)胞進(jìn)行傳代后,，建議前3-5代培養(yǎng)條件可適當(dāng)提高血清含量以促進(jìn)恢復(fù)細(xì)胞原有狀態(tài)并縮短到達(dá)對數(shù)期的時間。

⑧ 市面上血清魚龍混雜,，假血清（BSA或替代物冒充血清）,、劣質(zhì)血清（小牛冒充胎牛）、水貨（國產(chǎn)冒充進(jìn)口）屢見不鮮,，若客戶培養(yǎng)細(xì)胞過程中明顯感覺細(xì)胞生長速度不及預(yù)期,，且無法更換血清，建議酌情提高血清含量來彌補血清質(zhì)量的缺陷,，以期提高細(xì)胞生長速度,。

⑨實驗結(jié)束后，將臺子內(nèi)的細(xì)胞放回培養(yǎng)箱,，試劑放回冰箱,，最后噴灑Deeming實驗室安全衛(wèi)士，預(yù)防微生物污染,，關(guān)閉生物安全柜,，打開紫外滅菌30分鐘以上。

√特別提醒：

1.復(fù)蘇的細(xì)胞千萬千萬別放冰箱,，冷凍冷藏都不可以,，這是活細(xì)胞，不是試劑,，切記?。?！

2.由于大部分的細(xì)胞系比較容易培養(yǎng),，以致于"問題血清“不能被及時發(fā)覺，但部分細(xì)胞對于血清品質(zhì)有嚴(yán)格要求,，用“問題血清“培養(yǎng)細(xì)胞極易造成細(xì)胞脫落,、死亡，務(wù)必要擦亮眼睛,，選擇靠譜的血清供應(yīng)商,。

2、對于凍存細(xì)胞

① 收到快遞后,，若發(fā)現(xiàn)凍存管破損,、箱內(nèi)已無干冰，請拍照后及時聯(lián)系供貨商,。

② 收到細(xì)胞后請盡快復(fù)蘇,，給凍存管（外觀×1張）拍照留存，隔天在倒置顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，給細(xì)胞（100倍×2張,，200倍×2張）拍照,，售后時需提供。

③ 復(fù)蘇細(xì)胞時不可直接將凍存管丟進(jìn)水浴鍋,，用鑷子夾住凍存管頂部,，將凍存管下部浸入水中即可,，由于水浴鍋處于實驗室暴露,、高溫、濕潤環(huán)境,，極易滋生各種微生物,，建議在水浴鍋中加入Deeming水浴鍋安全衛(wèi)士抑制各類微生物的滋生，大程度上防止水浴鍋中的微生物對凍存細(xì)胞造成的污染,。

④ 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作，凍存管,、試劑,、耗材拿進(jìn)去之前一定要用75%酒精消毒，培養(yǎng)試劑盡量不要共用,，若有共用試劑,，建議配成完培后整體過濾除菌。

⑤ 原代細(xì)胞傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ,，保種1支,，另外1支傳代至T25新瓶，前面代次建議代代保種,，以妨出現(xiàn)問題后無種可用,，原代細(xì)胞需根據(jù)生長狀況判斷傳代比例。

⑥ 第一次傳代時需要摸索消化時間,，建議每隔30s就觀察一次,，并記錄消化時間，細(xì)胞會隨著后期傳代次數(shù)的增多而延長消化時間,。

⑦ 由于細(xì)胞在運輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時間顛簸,，收到細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇后，前1-2代培養(yǎng)可適當(dāng)提高血清含量以促進(jìn)恢復(fù)細(xì)胞原有狀態(tài)并縮短到達(dá)對數(shù)期的時間,。

⑧ 原代細(xì)胞建議選用廠家供應(yīng)的專用培養(yǎng)基,，否則可能會因為改變培養(yǎng)條件，大大縮短細(xì)胞的培養(yǎng)代數(shù),，造成種子細(xì)胞的浪費,。

⑨ 及時更換和補充培養(yǎng)箱水盤內(nèi)的水，建議加入Deeming細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤安全衛(wèi)士進(jìn)行污染物的預(yù)防,。

⑩ 購買的細(xì)胞僅供科研使用,，不得用于人體或其他?。。,?！