很多科研人員在血清解凍后會發(fā)現(xiàn)渾濁及絮狀物質(zhì),這時候大家難免會擔(dān)心:這血清是不是污染了，還能用嗎?帶著這個疑惑,，繼續(xù)往下看........

血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體,，是血漿去除纖維蛋白后的混合物，主要成分包括蛋白質(zhì),、氨基酸,、糖類、維生素和多肽（如生長因子,、胰島素,、促生長激素）等。血清是細(xì)胞培養(yǎng)過程中重要的營養(yǎng)物質(zhì),，同時也對細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用,。

一、常見的幾種血清沉淀物

二,、血清中的沉淀是什么,？

用于細(xì)胞培養(yǎng)的各種血清產(chǎn)品中都存在各種類型的沉淀。除了膽固醇和一些蛋白沉淀之外,，血清中也會含有纖維蛋白和磷酸鈣,。雖然沉淀可引起初始問題，但在細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用方面,，沉淀一般不會對血清的性能產(chǎn)生影響,。

1、纖維蛋白

血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型,。由于在生產(chǎn)過程中,血清采集,、過濾(3次0.1 um過濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成，此時血清中纖維蛋白原處于溶解狀態(tài),。但在解凍之后,，血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集形成肉眼可見的沉淀。

2,、磷酸鈣

常見的一種沉淀物,，會造成血清渾濁,并且在37℃C培養(yǎng)的時候會增加,。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn),并且由于布朗運(yùn)動看上去像在活動,因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。

3,、其他成分

血清中的其他成分也會形成沉淀,例如膽固醇和其他蛋白沉淀等,。

三、血清沉淀是污染嗎,？

無論是較大的絮狀纖維蛋白還是小黑點(diǎn)樣的磷酸鈣,，都容易被誤認(rèn)為是細(xì)菌污染，但其實(shí)血清沉淀并不是污染,。由于在37℃的溫度下培養(yǎng),，會加劇纖維蛋白的析出和磷酸鈣顆粒產(chǎn)生，可采用空培方式驗(yàn)證污染,，血清按所需比例加入無菌培養(yǎng)基中（不加雙抗）,，放培養(yǎng)箱中過夜，觀察空培外觀,，若為澄清,，則血清無污染。還可以通過將血清接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),，觀察是否存在細(xì)菌增殖,，并且進(jìn)行革蘭氏染色，用油鏡觀察直接判斷是否為微生物污染,。

三,、血清沉淀會影響細(xì)胞生長嗎？

血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性,，各品牌的血清均有沉淀的出現(xiàn),，過于澄清的血清并不代表更高的品質(zhì)，也可能是在加工過程中提前進(jìn)行“預(yù)老化",，即反復(fù)凍融盡可能的去除纖維蛋白原的結(jié)果,。

血清沉淀的多少與血清的使用效果沒有必然關(guān)系，血清沉淀并不會影響細(xì)胞的正常生長,。

四,、如何避免過多沉淀出現(xiàn)?

正確的使用和保存血清是避免沉淀產(chǎn)生的關(guān)鍵!

★非必須不用熱滅活(熱滅活會使血清中部分蛋白質(zhì)變性析出影響血清品質(zhì))

★不宜37℃預(yù)熱,血清和wan全培養(yǎng)基通常室溫預(yù)熱即可

★避免反復(fù)凍融,分裝使用

★避免紫外線照射

★避免2-8℃長期保存,分裝后-20℃長期保存,按需融解使用

五、血清的正確解凍方法:

應(yīng)按照逐步解凍的方式解凍血清:從-20°C取出后放置到4℃C融解,。在解凍過程中,請注意時不時緩慢搖晃瓶子,減少沉淀的產(chǎn)生,。注意直接室溫或者水浴融解都容易造成沉淀增多。

注意注意?。,。?/span>血清融解過程約持續(xù)二十小時左右,所以記得在試驗(yàn)前提前融解!

五、去除沉淀的方法?

如果血清中含有沉淀,，不建議直接過濾血清,。若去除這些絮狀沉淀物，可將血清分裝至無菌離心管中,，以400g離心5min,，去除大顆粒沉淀，上清液加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。

六、總結(jié):

綜上所述,，在我們培養(yǎng)細(xì)胞的過程中,，血清出現(xiàn)沉淀是正常情況，無論是較大的絮狀纖維蛋白還是小黑點(diǎn)樣的磷酸鈣,，都不是污染,，且沉淀不會影響細(xì)胞的培養(yǎng)效果，可以放心使用,。