實驗室培養(yǎng)的細(xì)胞種類可以大致分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞兩種，只有極少數(shù)類型細(xì)胞同時存在兩種狀態(tài),。

   懸浮細(xì)胞是指不需要依賴支持物,，可在培養(yǎng)基中以懸浮狀態(tài)生長的一類細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞和大部分血液系統(tǒng)來源細(xì)胞,。（如小鼠白血病細(xì)胞WEHI-3, 人白血病細(xì)胞K-562, HL-60）,。工業(yè)上也有越來越多的貼壁傳代細(xì)胞被馴化出來，進(jìn)行全懸浮的培養(yǎng),。目前在工業(yè)中應(yīng)用的主要有SP2/0,、NS0、CHO,、BHK和HEK293細(xì)胞等,，它們主要用于重組蛋白質(zhì)生產(chǎn)；在獸用生物制品中常用的傳代細(xì)胞主要有采用全懸浮培養(yǎng)的BHK21細(xì)胞,、MDCK細(xì)胞,；及借助微載體懸浮培養(yǎng)的Vero細(xì)胞、PK細(xì)胞、ST細(xì)胞,、 Marc145細(xì)胞等,，每種細(xì)胞的特性都不同。

一般情況下,，懸浮細(xì)胞相較于貼壁細(xì)胞的處理更加簡單一些,，因為懸浮細(xì)胞傳代時無須胰酶消化。但這并不意味著懸浮細(xì)胞比貼壁細(xì)胞好養(yǎng),，對新手來說,，反而更具挑戰(zhàn)性?？偸菚龅礁鞣N各樣的問題：比如,，為什么總是出現(xiàn)死細(xì)胞和細(xì)胞分化；說好了傳代很easy的,，結(jié)果會出現(xiàn)分化,；養(yǎng)好了凍存復(fù)蘇后又出現(xiàn)問題了！

接下來,，我們一起探討一下關(guān)于培養(yǎng)懸浮細(xì)胞的幾個要點(diǎn)吧：

 要點(diǎn)一：足夠的耐心,，這是非常必要的  

很多懸浮細(xì)胞在剛從凍存狀態(tài)復(fù)蘇時活力是相對較差的，此時我們需要有足夠的耐心,，等待細(xì)胞完成自我修復(fù)進(jìn)入對數(shù)增長期,。比如THP-1（人單核細(xì)胞白血病）從解凍到恢復(fù)正常增殖往往需要7-10天的恢復(fù)期,；Jurkat,，Clone E6-1(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)復(fù)蘇后也需要5-7天才能恢復(fù)到凍存前的狀態(tài)。新手可能會在此期間放棄培養(yǎng),，所以,，請多一點(diǎn)耐心哦！培養(yǎng)這類細(xì)胞也是培養(yǎng)耐心的過程呢,！

要點(diǎn)二：接種密度的把握

一般來說,，懸浮細(xì)胞接種時密度不應(yīng)低于50萬個/ML，很多懸浮細(xì)胞有密度依賴,，密度低導(dǎo)致的不增殖也是新手常見問題之一,。當(dāng)然，有極少數(shù)細(xì)胞在密度高時反而狀態(tài)變差,，如W6/32（小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞）。因此,，培養(yǎng)不了解的細(xì)胞前查找相關(guān)資料去掌握細(xì)胞特性非常重要,，知己知彼，方能百戰(zhàn)不殆嘛,！

要點(diǎn)三：換液方法及頻率

換液頻率不應(yīng)該被限制得“明明白白",，細(xì)胞是活物,，在一個連續(xù)培養(yǎng)周期內(nèi)，視細(xì)胞生長狀態(tài)可分多次添加補(bǔ)充培養(yǎng)基,、葡萄糖等特定營養(yǎng)成份,，維持細(xì)胞良好的生長狀態(tài)。懸浮培養(yǎng)過程中,，隨著細(xì)胞的增殖,，原有培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的消耗，代謝產(chǎn)物的增加,，細(xì)胞的活率會下降,，及時補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì)，使細(xì)胞處于一個相對良好的生存環(huán)境,。這里就不再贅述,，切忌頻繁離心換液。下面著重聊一聊換液方法：

①離心全換液法?

即通過離心（800-1000rpm,，5min）去除全部舊的培養(yǎng)基,，更換新鮮培養(yǎng)基。該方法適合“皮實“好養(yǎng)的懸浮細(xì)胞換液(如K562),，或者當(dāng)前細(xì)胞狀態(tài)良好,、密度較高導(dǎo)致培養(yǎng)基消耗較大的情況。此方法的優(yōu)點(diǎn)是換液*,，能去除部分細(xì)胞碎片,，但是同樣會對細(xì)胞造成一定程度的機(jī)械損傷。

②離心半換液法

 即通過離心（800-1000rpm,，5min）50%細(xì)胞懸液,，更換50%體積的新鮮培養(yǎng)基。該方法適合比較“矯情“難養(yǎng)的細(xì)胞（如thp-1）,，或者正在調(diào)整狀態(tài)中,、密度較低但碎片較多需要去除的情況。

③沉降換液法

即不使用離心機(jī)而是利用重力自然沉降的方法,，將培養(yǎng)基與細(xì)胞分離,，達(dá)到全部或部分更換新鮮培養(yǎng)基。但是其有應(yīng)用局限性—只適合能成一定大小細(xì)胞團(tuán)（否則無法自然沉降,，只能低速離心）的細(xì)胞,，尤其是處理依賴細(xì)胞聚集才能增殖的細(xì)胞時非常值得推薦，如NK-92,、NK-92 MI,、Jurkat。該方法能在換液過程中最大限度避免離心過程造成的機(jī)械損傷，同時保留聚集的細(xì)胞團(tuán),，并且去除細(xì)胞碎片也較為*,。

掌握了以上幾點(diǎn)，再加上一株好的細(xì)胞種子,，養(yǎng)出“漂亮“的懸浮細(xì)胞就指日可待啦,！