支原體污染一直是細(xì)胞培養(yǎng)的“頭號(hào)敵人",，但是支原體的存在卻十分普遍，它的“不請(qǐng)自來"總是讓我們措手不及,。世界上有近60%的實(shí)驗(yàn)室正在遭受支原體污染的困擾,，今天就讓我們來好好認(rèn)識(shí)這個(gè)“刺頭"吧！

什么是支原體,？

支原體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,，具有高度多形性、無細(xì)胞壁,、增殖緩慢,、可在人工培養(yǎng)基中存活并增殖的特點(diǎn)。除此之外,，它的“個(gè)頭"很小,，只有0.1-0.3um，可通過一般的濾菌器,。支原體主要以二分裂方式繁殖,，亦可以出芽方式繁殖，分枝形成絲狀后斷裂呈球桿狀顆粒,。大部分支原體繁殖速度比細(xì)菌慢,，適宜生長(zhǎng)溫度為35℃，最適pH值為7.8～8.0,。在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí),，形成典型的“荷包蛋"狀菌落。

支原體是如何“欺負(fù)"細(xì)胞的,？

我們知道一株被支原體污染的細(xì)胞是無法用來做實(shí)驗(yàn)得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的--一方面是因?yàn)橹гw本身也是一種原核細(xì)胞生物,，相當(dāng)于一種交叉污染；另一方面,，細(xì)胞感染支原體后,，由于支原體大量消耗培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)和細(xì)胞代謝的基礎(chǔ)成分，包括核酸前體,、氨基酸,、維生素、脂質(zhì),、膽固醇等,，導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢及各種代謝、功能紊亂甚至喪失,；除此之外,，支原體還會(huì)吸附在細(xì)胞表面，破壞細(xì)胞膜的完整性,，更有少數(shù)類型支原體可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),，如發(fā)酵支原體,、生殖支原體和肺炎支原體。

如何“確診"細(xì)胞支原體污染,？

支原體污染之所以讓廣大科研人員頭疼,，是因?yàn)樗谄胀ü鈱W(xué)顯微鏡下難以被發(fā)現(xiàn)，并且細(xì)胞被污染早期不會(huì)表現(xiàn)出明顯的“癥狀",。

一般來說,，如果培養(yǎng)過程中細(xì)胞增殖突然變慢，培養(yǎng)基中黑點(diǎn),、碎片明顯增多,，培養(yǎng)基PH變化（變黃）周期變短，那么細(xì)胞很可能已經(jīng)感染了支原體,。這時(shí)候,，就需要使用各種檢測(cè)手段來確認(rèn)。目前常用的方法有：DNA染色法,，支原體培養(yǎng)法,，PCR法（包括凝膠電泳和熒光定量）,，化學(xué)發(fā)光法,。前兩種方法結(jié)果可靠，但實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng),。PCR法原理是在支原體16S rRNA基因的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物,，通過檢測(cè)支原體DNA來檢測(cè)細(xì)胞中有無支原體的污染，得到的廣泛應(yīng)用,。

細(xì)胞“確診"支原體污染后,，怎么辦？

如果您的細(xì)胞不幸感染了支原體,，比較好處理方式是立即丟棄該細(xì)胞,，并對(duì)培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)等設(shè)施及場(chǎng)所進(jìn)行消毒滅菌,。因?yàn)橹гw的傳播非常隱秘,，相關(guān)研究表明其甚至能通過氣溶膠傳播。當(dāng)然,，如果您的細(xì)胞非常珍貴或者不能再獲得,，可以嘗試使用抑制支原體的藥物進(jìn)行處理，嘗試消除支原體污染,。能抑制支原體的藥物有四環(huán)素,；大環(huán)內(nèi)酯類藥物，如羅紅霉素,、克拉霉素,、阿奇霉素等,；喹諾酮類藥物，如氧氟沙星,、司帕沙星等,。

這個(gè)過程一般周期較長(zhǎng)，因?yàn)槭褂盟幬锾幚頃r(shí)需配合多次大比例連續(xù)傳代來提高成功率,。堅(jiān)持,，就是勝利！

千舍生物熱賣細(xì)胞：

人食道癌細(xì)胞 kyse30

人食管鱗癌細(xì)胞 kyse150

人食道鱗狀細(xì)胞癌 KYSE-410

人肝癌細(xì)胞 Li-7

人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 LN229

人前列腺癌細(xì)胞 LNCaP clone FGC

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 lovo

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株 LOVO/5FU

人結(jié)直腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LOVO+LUC

人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 LS1034

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 LS174T

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 LS180

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 LS513

人肝星形細(xì)胞 LX-2

人肝星形細(xì)胞+GFP LX-2+GFP

人肝癌細(xì)胞 Mahlavu

人乳腺上皮細(xì)胞 MCF-10A

人乳腺癌細(xì)胞 MCF-7

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞 MCF-7/Adr

人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MCF-7+luc

人乳腺細(xì)胞 MDA-KB2

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-157

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231

人乳腺癌X細(xì)胞+GFP MDA-MB-231+GFP

人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MDA-MB-231+LUC

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-361

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-415

人黑素瘤細(xì)胞 MDA-MB-435S

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-436

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-453

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-468

人子宮頸表皮癌細(xì)胞 ME-180

人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 MEG-01

人膜間皮細(xì)胞 MET-5A

人骨肉瘤細(xì)胞 MG63

人胃癌細(xì)胞 MGC-803

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞 MHCC-97H

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MHCC-97H+luc

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞 MHCC-97L

人胰腺癌細(xì)胞 MIA-PACA-2

人胃癌細(xì)胞 MKN-45

人胃癌細(xì)胞 MKN-74

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 MM.1R

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 MM.1S

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MOLT-4

人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞 MonoMac6

人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5（有限細(xì)胞系）

人子宮頸表皮癌細(xì)胞 MS751

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MT-4

人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞 MUM2B

人前B急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 NALM-6

急性早幼粒細(xì)胞株 NB 4

人畸胎癌細(xì)胞 NCCIT

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H1299

人肺腺癌細(xì)胞 NCI-H1395

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1437

人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 NCI-H157

人肺支氣管癌細(xì)胞 NCI-H1650[H1650]（MKN-1）