細(xì)胞培養(yǎng)過程中容易出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題都是在細(xì)胞生長方面來說,，比如細(xì)胞的不貼壁、生長緩慢,、生長不好,，甚至死亡的原因，這些問題使得細(xì)胞研究者很是頭疼，下面是針對這些問題的原因和解決方法：

一,、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
可能原因：
1.胰蛋白酶消化過度 ,；
2.支原體污染 ；
3.培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）,；               
4.細(xì)胞老化 ,；

5.接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 。

解決方法：
1.縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度,；
2.分離培養(yǎng)物,，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱,。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,，丟棄培養(yǎng)物；
3.使用無菌酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2 ,；
4.啟用新的保種細(xì)胞 ,；
5.調(diào)節(jié)*佳接種細(xì)胞濃度。
二,、懸浮細(xì)胞成簇
可能原因：
1.培養(yǎng)液中含鈣,、鎂離子 ；
2.支原體污染,；
3.蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解,；
4.DNA污染 。
解決方法：
1.用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液,；
2.分離培養(yǎng)物，檢測支原體,；
3.用DNaseI處理細(xì)胞,。
三、培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢
可能原因：
1.由于更換不同培養(yǎng)液或血清,；
2.培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞,；
3.培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；
4.試劑保存不當(dāng),；
5.接種細(xì)胞起始濃度太低,；
6.細(xì)胞已老化；
7.支原體污染 ,。
解決方法：
1.比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液,；
2.換入新鮮配置培養(yǎng)液,，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長因子,；
3.用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染,，丟棄培養(yǎng)物,；
4.血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存,。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,，需在1周內(nèi)用完；
1.增加接種細(xì)胞起始濃度,；
2.換用新的保種細(xì)胞,；
3.分離培養(yǎng)物，檢測支原體,。清潔支架和培養(yǎng)箱,。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物,。
四,、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好
可能原因：
1.細(xì)胞本身的狀態(tài)
細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化,；
細(xì)胞的接種量：接種量過低,，細(xì)胞生長緩慢；
細(xì)胞傳代時(shí)間過晚：細(xì)胞中毒,，影響傳代后的細(xì)胞生長,；
胰酶消化時(shí)間過長或過短：時(shí)間過長，細(xì)胞死亡,；時(shí)間過短,，細(xì)胞未*分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡,；
細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融,。
2.污染
支原體污染；
霉菌污染,。
3.培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證,；
選擇的培養(yǎng)基是否合適；
培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤,。
4.培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常,；
培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確,。
解決方法：
根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因,，做出針對性的解決方案
1.注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等,；
2.避免產(chǎn)生污染（用正規(guī),、合法、可溯源的血清）；
3.要用合適的血清或培養(yǎng)基,，最好經(jīng)過驗(yàn)證,；
4.注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境。
五,、培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因：
1.培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2,；
2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大；
3.細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷,；
4.培養(yǎng)液滲透壓不正確,；
5.培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。
解決方法：
1.檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2,；
2.檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度,；
3.取新的保存細(xì)胞種；
4.檢測培養(yǎng)液滲透壓,；
5.換入新鮮培養(yǎng)液,。