24,、培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點(diǎn),，是污染嗎?

首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁,，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則,，是否運(yùn)動(dòng),，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng),。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng),，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的),，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,。如果黑點(diǎn)大小一致,，快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染,。

25,、如何預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)的產(chǎn)生?

掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)，不要細(xì)胞長(zhǎng)老了再傳代;掌握好消化時(shí)間,，防止消化過度產(chǎn)生細(xì)胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳;嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔,。

26、黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了,，如何進(jìn)行處理?

如果判定黑點(diǎn)是污染,，請(qǐng)及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況,，可參照以下進(jìn)行：

如果是懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞上清慢速離心(500-600 rpm/min,，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS洗2-3遍，洗的時(shí)候,，輕輕拍打培養(yǎng)瓶,，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS,，消化時(shí)先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右,，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶,，然后正常消化細(xì)胞,，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶,，并可以嘗試適當(dāng)增加血清濃度進(jìn)行培養(yǎng),。

27、培養(yǎng)用dish,flask是否相同,？

不同廠牌的dish或flask,，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同,，雖對(duì)大部分細(xì)胞沒有太大之影響,，惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠牌不同之dish或flask而有顯著之生長(zhǎng)差異。