細胞培養(yǎng)問題----沉淀

當排除了污染后,，細胞培養(yǎng)基的渾濁通?？梢越忉尀榻饘?、蛋白質和其他培養(yǎng)基成分的沉淀。沉淀物可能對細胞健康有害,，因為他們可能通過整合作用等過程去除營養(yǎng)物質和其他需要的成分,，從而改變培養(yǎng)基成分,。

沉淀的原因

溫度變化

溫度是細胞培養(yǎng)中沉淀的主要原因之一,。當暴露于端溫度變化時，高分子量的血漿蛋白會從溶液中沉降,。熱失活和凍融循環(huán)會促進蛋白質的變性和沉淀,。由于液體或復溶培養(yǎng)基在每次使用之間保持冷藏狀態(tài)，鹽可能會沉淀出來,，特別是10倍或其他濃縮液中析出,。

失水引起的濃度變化

如果培養(yǎng)基存在蒸發(fā)，培養(yǎng)基組分（包括鹽）的濃度將增加,。在培養(yǎng)基的表面特別容易形成晶體沉淀,。

鈣鹽

在制備無血清培養(yǎng)基時，組分的添加順序可能會導致不溶性分子的形成,。鈣鹽特別容易沉淀,。例如，CaCl₂和MgSO₄在溶液中反應形成CaSO₄晶體,。高壓滅菌和pH值不穩(wěn)定可能會加劇這一問題,。

金屬元素補充劑

銅、鐵和鋅金屬元素是細胞生長所必需的,，是無血清培養(yǎng)基的重要補充劑,。其他血清成分的缺失可能會導致這些金屬在培養(yǎng)基中沉淀,，產生一個對細胞有毒的環(huán)境。銅和鋅在氧化條件下更加容易沉淀,。

污染

培養(yǎng)基渾濁可能是細菌或真菌污染造成的,。

細胞培養(yǎng)中對沉淀的故障排除

溫度

有關培養(yǎng)基的最佳儲存和處理，應參閱制造商指南,。避免重復的凍融循環(huán),。

鈣鹽

在逐個加入其他培養(yǎng)基組分之前，先將CaCl₂單獨溶解在去離子水中,。

濕度

確保燒瓶和培養(yǎng)皿不存在蒸發(fā),。監(jiān)測培養(yǎng)箱的濕度，密封培養(yǎng)器皿,，防止干燥,。

其他金屬

加入鐵結合蛋白轉鐵蛋白可防止鐵在培養(yǎng)基中沉淀。

污染

丟棄被污染的細胞并對培養(yǎng)箱體進行消毒,。遵循良好的實驗室措施以避免污染,。

有目的的沉淀

盡管通常在細胞培養(yǎng)中不希望有沉淀，但是沉淀可以用作上清液中蛋白質的純化策略,。例如,，硫酸銨沉淀法有時被稱為“鹽析"技術，用于從雜交瘤上清液或血清中純化抗體,。