霉菌毒素是由真菌產(chǎn)生的有毒的次級(jí)代謝產(chǎn)物,,其可以通過(guò)飼料或食品進(jìn)入到人和動(dòng)物體內(nèi),,從而引起急性或慢性中毒,危害人類和動(dòng)物健康,。霉菌的生長(zhǎng)與地域,、氣候、季節(jié)等密切相關(guān),因此不同地區(qū),、時(shí)間,、季節(jié)的飼料和飼料原料受霉菌毒素污染的情況也有所不同。
目前關(guān)于霉菌毒素的檢測(cè)方法主要有:薄層色譜法(TLC),、酶聯(lián)免疫法(ELISA),、氣相色譜法(GC)和高效液相色譜法(HPLC)等。由于TLC和ELISA方法不能準(zhǔn)確定量,,GC方法雖然檢測(cè)靈敏度高,,但樣品前處理復(fù)雜,雜質(zhì)干擾大,。目前對(duì)霉菌毒素的檢測(cè)用HPLC法比較認(rèn)可,,用免疫親和柱對(duì)經(jīng)過(guò)萃取的樣品進(jìn)行凈化后,雜質(zhì)少,,檢測(cè)限低,。經(jīng)試驗(yàn)摸索研究,建立了免疫親和柱-高效液相色譜檢測(cè)的方法,,該方法靈敏度高,、回收率高、重復(fù)性好,。本研究的目的是利用免疫親和柱-高效液相色譜法調(diào)查中國(guó)各個(gè)地區(qū)飼料及原料中AFB1,、ZEN和DON的污染情況,為飼料生產(chǎn)企業(yè)和養(yǎng)殖者提供參考,。
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)材料
高效液相色譜儀(SHIMADZU LC-20AT),;熒光檢測(cè)器(SHIMADZU RF-20A);色譜柱為cloversil C18色譜柱,,5μm,,4.6mm×150mm;色譜工作站(島津高效液相色譜LC工作站),;AFB1,、ZEN和DON免疫親和柱,由北京中檢維康技術(shù)有限公司生產(chǎn),。具體操作步驟參考中檢維康公司霉菌毒素檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序,。
1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 樣品采集
1.2.2 試樣的制備與提取
試樣制備與提取的具體操作步驟參考中檢維康公司免疫親和柱的標(biāo)準(zhǔn)操作程序執(zhí)行。
1.2.3 毒素的檢測(cè)
使用免疫親和柱-高相液相色譜法對(duì)樣品中的AFB1,、ZEN和DON進(jìn)行檢測(cè),。黃曲霉毒素檢測(cè)方法參照GB/T 30955-2014《飼料中黃曲霉毒素B1、B2,、G1,、G2的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》中的測(cè)定方法,,并根據(jù)試驗(yàn)情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整;玉米赤霉烯酮檢測(cè)方法參照GB/T 28716-2012《飼料中玉米赤霉烯酮的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》中的測(cè)定方法,,并根據(jù)試驗(yàn)情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,;嘔吐毒素檢測(cè)方法參照GB/T 30956-2014《飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》中的測(cè)定方法,并根據(jù)試驗(yàn)情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,。
2 結(jié)果與分析
按照飼料樣品中AFB1,、ZEN和DON含量高于檢出限作為檢出,本研究中陽(yáng)性樣品設(shè)定檢出限值如下:AFB1 0.5μg/kg,、ZEN 1μg/kg和DON 10μg/kg,。飼料和原料中AFB1,、ZEN和DON允許參照我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 13078-2017《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》執(zhí)行,。
2.1 所有樣品總體情況
飼料樣品中4種霉菌毒素均存在超標(biāo)現(xiàn)象,且樣品中黃曲霉毒素B1,、玉米赤霉烯酮的陽(yáng)性檢出率高于2020年,;
植物性原料中4種霉菌毒素均存在超標(biāo)現(xiàn)象,且樣品中玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素的最高值高于2020年,;
粕類,、麩類樣品中玉米赤霉烯酮、T-2毒素和嘔吐毒素均存在超標(biāo)現(xiàn)象,;
玉米副產(chǎn)物中4種霉菌毒素均存在超標(biāo)現(xiàn)象,,且樣品中玉米赤霉烯酮的最高值高于2020年;玉米樣品中赤霉烯酮和嘔吐毒素污染較嚴(yán)重,。
此外,,多種毒素共存現(xiàn)象明顯,霉菌毒素的共同污染可以產(chǎn)生累加和協(xié)同的毒性作用,;在這項(xiàng)研究中,,樣品中霉菌毒素共同污染非常普遍,超過(guò) 95% 的樣品含有2 種或更多的霉菌毒素,。
總之,,我國(guó)飼料及原料中霉菌毒素污染仍處于一個(gè)較危險(xiǎn)的水平,必須加強(qiáng)對(duì)各類霉菌毒素的檢測(cè)和長(zhǎng)期監(jiān)控,,這對(duì)更有力地保障畜禽養(yǎng)殖發(fā)展和食品安全非常必要,。