蛋白免疫共沉淀Co-IP技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)簡(jiǎn)介

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究?jī)煞N蛋白質(zhì)相互作用的有效方法,。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,，也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔，已成為研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,。

當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。當(dāng)用預(yù)先固化在argarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白,，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來(lái),。再通過(guò)蛋白變性分離，對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測(cè),，進(jìn)而證明兩者間的相互作用,。

這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實(shí)際情況,，得到的結(jié)果可信度高,。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。

蛋白免疫共沉淀Co-IP技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)價(jià)格與周期

免疫共沉淀服務(wù)步驟

（1）轉(zhuǎn)染后24-48 h 可收獲細(xì)胞,，加入適量細(xì)胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑）,，冰上裂解30min, 細(xì)胞裂解液于4°C， 大轉(zhuǎn)速離心30 min后取上清,；

（2）取少量裂解液以備Western blot分析,，剩余裂解液加1μg相應(yīng)的抗體加入到細(xì)胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過(guò)夜,；

（3）取10μl protein A 瓊脂糖珠,，用適量裂解緩沖液洗3 次，每次3,000 rpm離心3 min,；

（4）將預(yù)處理過(guò)的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過(guò)夜的細(xì)胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h,，使抗體與protein A瓊脂糖珠耦聯(lián)；

（5）免疫沉淀反應(yīng)后,，在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min,，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去,，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次,；后加入15μl的2×SDS 上樣緩沖液，沸水煮5分鐘,；

（6）SDS-PAGE, Western blotting或質(zhì)譜儀分析,。

客戶提供

客戶提供蛋白樣品和沉淀用抗體；

新鮮的樣本材料（組織,、細(xì)胞或蛋白溶液）；

用于western blot的一抗,。

生物服務(wù)承諾
免疫共沉淀電子圖片及分析結(jié)果,；
相互作用蛋白鑒定結(jié)果，質(zhì)譜鑒定結(jié)果和（或）western blot鑒定結(jié)果,。