PCR實驗室工程 設計規(guī)劃

PCR基因擴增實驗室平面圖
 PCR擴增檢驗實驗室原則上分為三個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準備區(qū),、標本制備區(qū),、擴增和擴增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染,，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行,，即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增和擴增產(chǎn)物分析區(qū)。各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
(1)試劑貯存和準備區(qū)
　　該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備,、試劑的分裝和主反應混合液的制備,。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域,。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,，本區(qū)應對外界保持微正壓,。
(2)標本制備區(qū)
　　該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA,、DNA)提取,、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓,，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染,。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,，所以應避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動,。
(3-4)擴增和擴增產(chǎn)物分析區(qū)
　　該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增和擴增片段的測定。此外,，已制備的DNA模板(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行,。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出,。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動,。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進行,。
   PCR區(qū)完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù),，應該留出一個專門用于反應后處理樣品的地方,。后PCR活動中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用于這一目的,，決不能把實驗室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動,。產(chǎn)物分析區(qū)如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當合并,。
(5)緩沖區(qū)與沖洗區(qū)
　　整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊,。每個獨立實驗區(qū)設置有緩沖區(qū)，同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染,。
 可打開緩沖區(qū)Ⅰ，緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴增區(qū)的排風扇往外排氣,，在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風量可調(diào)的回風口,，空氣通過回風口向室內(nèi)換氣,。外面有用于實驗后消毒，消毒區(qū)域有清洗液和潔凈洗手池,，以及消毒紙巾,。
　　若房間進深允許，可設PCR內(nèi)部走廊,。需要指出的是在減少室內(nèi)外空氣交換方面,，緩沖間比走廊更有意義。
　　各個區(qū)域之間應具備單向的實驗工藝流,、物流,、人流與氣流，形成單向流程的保護屏障,，避免實驗之間的相互干擾,，防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。 

PCR實驗室工程 設計規(guī)劃