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細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境如何設(shè)計(jì)
一、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)
細(xì)胞培養(yǎng)是一種無(wú)菌操作技術(shù),，要求工作環(huán)境和條件必須保證無(wú)微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響,，要求工作環(huán)境清潔,、空氣清新、干燥和無(wú)煙塵,。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無(wú)菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè),，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室,。
二,、常用設(shè)施及設(shè)備
（1）超凈工作臺(tái)：也稱凈化工作臺(tái)，分為側(cè)流式,，直流式和外流式三大類,。
（2）無(wú)菌操作間：一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成,。操作間放置凈化工作臺(tái)及二氧化碳培養(yǎng)箱,、離心機(jī)、倒置顯微鏡等,。緩沖間可放置電冰箱,、冷藏器及消毒好的無(wú)菌物品等。
（3）操作間：普通培養(yǎng)箱,、離心機(jī),、水浴鍋、定時(shí)鐘,、普通天平及日常分析處理物,。
（4）洗刷消毒間：烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等,。
（5）分析間：顯微鏡,、計(jì)算機(jī)及打印機(jī)等,。
三,、培養(yǎng)器皿
常用細(xì)胞培養(yǎng)器皿有培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板,、培養(yǎng)皿等,。常準(zhǔn)備量是使用量的三倍。器皿應(yīng)選擇透明度好,、無(wú)毒,、利于細(xì)胞粘附和生長(zhǎng)的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品,。常用的器皿有下面幾種：
（1）液體儲(chǔ)存瓶：用于儲(chǔ)存各種配制好的培養(yǎng)液,，血清等液體，常用規(guī)格有500ml,、250ml,、100ml等幾種。
（2）培養(yǎng)瓶：根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異,，用于細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞要求瓶壁厚簿均勻,，便于細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)和觀察，瓶口要大小一致,，口徑一般不小于1cm,，允許吸管伸入瓶?jī)?nèi)任何部位，規(guī)格有200ml,、100ml,、50ml、25ml,、10ml等幾種,。
（3）培養(yǎng)皿：用于開放式培養(yǎng)及其它用途。分直徑30mm,、60mm,、120mm等幾種。
（4）吸管：常用的有長(zhǎng)吸管和短吸管兩類,，長(zhǎng)吸管也稱刻度吸管,。其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管，刻度吸管用于移動(dòng)液體,。常用1ml和10ml兩種,。短吸管也叫滴管，分彎頭和直頭兩種。
（5）離心管：離心管是細(xì)胞培養(yǎng)中使用*泛的器皿,，根據(jù)用途不同形態(tài)各樣,，常用于細(xì)胞培養(yǎng)的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類。前者分別為50ml,、30ml,、15ml，后者則多為10ml和5ml,。
（6）其它：如三角燒瓶,、燒杯、量筒,、漏斗,、注射器等。
四,、細(xì)胞培養(yǎng)溫度
維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng),，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)溫度要求也不同,。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃,，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響甚至死亡,。
培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng),，溫度上升不超過(guò)39℃時(shí)，細(xì)胞代謝與溫度成正比,；人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù),；在40-41℃1小時(shí),，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù),；41-42℃1小時(shí),，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡,，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能,；當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí)，細(xì)胞全部死亡,。
相反,，溫度不低于0℃時(shí)，對(duì)細(xì)胞代謝雖有影響,，但并無(wú)傷害作用,；把細(xì)胞放入25-35℃時(shí),，細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng)，但速度減慢,；放在4℃數(shù)小時(shí)后,，再回到37℃培養(yǎng)，細(xì)胞仍能繼續(xù)生長(zhǎng),。細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢,。當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí)，細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡,。但是,，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑(二甲亞砜或甘油)，可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長(zhǎng)期保存,。
五、合適的氣體環(huán)境
氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一,，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳,。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的能量和合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需用的各種成分,。開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中,。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需成分,，它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值,。大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4，偏離這一范圍對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響,。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些,，在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng)。但有一些細(xì)胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長(zhǎng),，如成纖維細(xì)胞蕞適合pH是7.4-7.6,。每種細(xì)胞都有其最適pH值。