1.    引言

慢病毒載體（Lentiviral Vector,，LV）,，基于人類免疫缺陷型病毒（HIV）發(fā)展,，不僅對(duì)分裂細(xì)胞,，而且對(duì)非分裂細(xì)胞都具有侵染能力。它能在體內(nèi)長期穩(wěn)定地表達(dá)基因,，因此在腫瘤免疫的過繼性細(xì)胞療法中,，特別是TCR-T和CAR-T細(xì)胞療法中得到了大面積應(yīng)用,。其中，慢病毒載體在CAR-T細(xì)胞的生產(chǎn)環(huán)節(jié)中起到關(guān)鍵作用,，通過攜帶目的基因的慢病毒載體侵染T細(xì)胞。而慢病毒的滴度,，直接關(guān)系到侵染是否成功,，是這一過程中的關(guān)鍵因素。

然而,，慢病毒載體由蛋白質(zhì)和核酸組成,，這使得其儲(chǔ)存條件面臨與其他生物制品類似的挑戰(zhàn)。例如,，它通常無法在常溫或4℃冷藏條件下長時(shí)間保存,，熱穩(wěn)定性差，且反復(fù)凍融會(huì)降低其滴度,。目前,，尚無理想的慢病毒載體凍存保護(hù)液，即使采用-80℃冷凍保存或加入甘油保護(hù)劑,，也無法有效防止慢病毒載體在儲(chǔ)存過程中滴度降低,。此外，慢病毒載體的運(yùn)輸需要低溫冷鏈,，這無疑增加了運(yùn)輸成本,，且無法百分之一百避免運(yùn)輸帶來的風(fēng)險(xiǎn)。

因此,，尋找一種有效的保護(hù)劑和儲(chǔ)存方法,，以穩(wěn)定慢病毒載體的滴度并簡化其運(yùn)輸過程，成為了亟待解決的問題,。這其中,，海藻糖作為良好的凍干保護(hù)劑，憑借其特別的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì),，展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力,。

2.    研究分析

華東師范大學(xué)沈鴻偉等在慢病毒載體凍干制劑的制備及穩(wěn)定性研究中發(fā)現(xiàn)，海藻糖作為一種良好的凍干保護(hù)劑,，在制劑制備及穩(wěn)定性方面發(fā)揮了重要作用,。這項(xiàng)研究為生物醫(yī)藥制劑等相關(guān)領(lǐng)域提供了新的思路和方法，進(jìn)一步推動(dòng)了海藻糖在慢病毒載體凍干制劑制備中的應(yīng)用,。

海藻糖在凍干保護(hù)中的優(yōu)勢在于其特別的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì),。海藻糖是一種非還原性雙糖，具有較好的熱穩(wěn)定性,、吸濕性和結(jié)晶性,。在冷凍干燥過程中，海藻糖可以有效地保護(hù)生物分子和細(xì)胞免受損傷，同時(shí)還可以抑制冰晶的形成,，減少干燥過程中細(xì)胞的破裂,。此外，海藻糖還具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和生物相容性,，可以與多種藥物和生物分子結(jié)合,，提高制劑的穩(wěn)定性和有效性。

在慢病毒載體凍干制劑的制備中,，海藻糖可以有效地保護(hù)病毒載體免受損傷,，提高制劑的病毒滴度和侵染力。同時(shí),，海藻糖還可以抑制制劑的聚集和沉淀,，提高制劑的均勻性和穩(wěn)定性。此外,，海藻糖還可以通過調(diào)節(jié)制劑的滲透壓和結(jié)晶狀態(tài),，控制制劑的復(fù)溶時(shí)間和質(zhì)量。

3.    凍干保護(hù)劑的選擇

凍干保護(hù)劑主要可分為以下幾類:一般為多羥基化合物,、糖類,、氨基酸、蛋白質(zhì),、聚合物和無機(jī)鹽等化合物,。因?yàn)閮龈杀Ｗo(hù)劑不但要具有保護(hù)生物制品活性的效果和結(jié)構(gòu)不發(fā)生改變，而且要具有凍干賦形的作用,。

糖是一種較的凍干保護(hù)劑,，本研究中采用的海藻糖屬于二糖，比蔗糖具有更低的吸濕性和更高的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度,，其羥基能替代水分子與蛋白質(zhì)分子表面部分結(jié)合,，而且海藻糖分子較小，能填充到蛋白質(zhì)分子的空隙中,，有效地限制蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,，在凍干時(shí)可以對(duì)慢病毒的蛋白衣殼形成保護(hù)，因此凍干制劑保護(hù)效果更好,。

氨基酸具有酸性羧基和堿性氨基,，能夠調(diào)節(jié)制品溶劑環(huán)境的pH值，不同類別的氨基酸具有不同的親水性功能,，而親水性強(qiáng)的氨基酸較易與蛋白質(zhì)產(chǎn)生氫鍵,，這對(duì)蛋白質(zhì)在凍干的過程中的穩(wěn)定性和活性具有重要的保護(hù)作用，如組氨酸,、丙氨酸等,，可以增加慢病毒載體包膜蛋白和組氨酸磷酸鹽緩沖液間的張力,，提高慢病毒載體包膜蛋白水化水平。而加入二價(jià)陽離子類,，如CaCl2和MgSO4這兩種無機(jī)鹽,，可延遲海藻糖結(jié)晶，通過和磷酸根陰離子存在下氫鍵網(wǎng)絡(luò)以及分子遷移率的變化抑制結(jié)晶,。