2016年BioNTech發(fā)表LPX-mRNA制劑的文章中mRNA原液中所采用的buffer為HEPES,。該研究中使用HEPES緩沖液配置1mg/ml的RNA原液,，用于進一步制備RNA-LPX,。
HEPES作為IVT反應(yīng)體系buffer具有優(yōu)勢,，這是我們結(jié)合相關(guān)文獻,，推斷BioNTech采用HEPES緩沖對作為mRNA原液buffer的原因,。
三、HEPES相較于其他緩沖體系較為突出的特點
1,、pKa隨溫度變化非常小,，buffer的pH值隨溫度漂移很小。
2,、性質(zhì)穩(wěn)定,，HEPES不會與其他離子發(fā)生相互作用，一方面HEPES不會與其他離子發(fā)生絡(luò)合影響其他離子功能,，另外一方面其他離子的存在不會影響HEPES的緩沖能力,。
3、細胞培養(yǎng)基中pH的維持主要依靠培養(yǎng)基中的碳酸氫鹽和5%的CO2共同維持,，當細胞處于開放環(huán)境時,，CO2逸散會導(dǎo)致pH快速上升脫離生理pH范圍，而添加HEPES緩沖對的培養(yǎng)基則不存在這方面問題,。
4,、HEPES不易穿過生物膜，不干擾細胞內(nèi)的生化反應(yīng),。
四,、使用HEPES緩沖體系時的注意事項
1、由于pai嗪基團的存在,，當HEPES暴露于光線中時,，會產(chǎn)生H2O2，這對培養(yǎng)的細胞或其它有生物活性的物體產(chǎn)生毒性,，同時對氧化還原敏感的物質(zhì)不宜共同使用,，因此HEPES作為緩沖液的操作應(yīng)盡量在避光條件下進行。
2,、HEPES在生化領(lǐng)域常見的使用濃度為10-25mM,，當濃度低于10mM時緩沖能力較弱，不能起到較好的緩沖效果,，當濃度較高時對一些細胞可能具有毒害作用,。
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