2016年BioNTech發(fā)表LPX-mRNA制劑的文章中mRNA原液中所采用的buffer為HEPES,。該研究中使用HEPES緩沖液配置1mg/ml的RNA原液,，用于進(jìn)一步制備RNA-LPX,。
HEPES作為IVT反應(yīng)體系buffer具有優(yōu)勢,，這是我們結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，推斷BioNTech采用HEPES緩沖對(duì)作為mRNA原液buffer的原因,。
三,、HEPES相較于其他緩沖體系較為突出的特點(diǎn)
1、pKa隨溫度變化非常小,，buffer的pH值隨溫度漂移很小,。
2、性質(zhì)穩(wěn)定,，HEPES不會(huì)與其他離子發(fā)生相互作用,，一方面HEPES不會(huì)與其他離子發(fā)生絡(luò)合影響其他離子功能，另外一方面其他離子的存在不會(huì)影響HEPES的緩沖能力,。
3,、細(xì)胞培養(yǎng)基中pH的維持主要依靠培養(yǎng)基中的碳酸氫鹽和5%的CO2共同維持，當(dāng)細(xì)胞處于開放環(huán)境時(shí),，CO2逸散會(huì)導(dǎo)致pH快速上升脫離生理pH范圍,，而添加HEPES緩沖對(duì)的培養(yǎng)基則不存在這方面問題。
4,、HEPES不易穿過生物膜,，不干擾細(xì)胞內(nèi)的生化反應(yīng)。
四,、使用HEPES緩沖體系時(shí)的注意事項(xiàng)
1、由于pai嗪基團(tuán)的存在,，當(dāng)HEPES暴露于光線中時(shí),，會(huì)產(chǎn)生H2O2，這對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞或其它有生物活性的物體產(chǎn)生毒性,，同時(shí)對(duì)氧化還原敏感的物質(zhì)不宜共同使用,，因此HEPES作為緩沖液的操作應(yīng)盡量在避光條件下進(jìn)行。
2,、HEPES在生化領(lǐng)域常見的使用濃度為10-25mM,，當(dāng)濃度低于10mM時(shí)緩沖能力較弱，不能起到較好的緩沖效果,，當(dāng)濃度較高時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能具有毒害作用,。
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