我們接著這個話題,，通過一篇美國俄勒岡州立大學藥學院的研究論文,，進一步討論緩沖體系對mRNA-LNP的影響,，供大家參考。該研究測試了三種常見生物緩沖液——HEPES,、Tris和PBS——在單次凍融前后與DLin-MC3-DMA mRNA-LNP制劑的相容性,。通過電子顯微鏡、差示掃描量熱法和膜流動性分析發(fā)現(xiàn),，不同緩沖液使LNP形態(tài)發(fā)生了不同的結(jié)構(gòu)變化,。采用體外和體內(nèi)模型測量mRNA轉(zhuǎn)染效率，發(fā)現(xiàn)Tris或HEPES緩沖液中的LNPs具有更好的冷凍保護效果以及與PBS相比更高的轉(zhuǎn)染效率,。

試驗結(jié)果：

脂質(zhì)納米顆粒（LNP）通常通過透析或與生理緩沖液(如PBS)交換緩沖液來中和,，純化后可直接注射入生物體。此外,，緩沖體系可以作為冷凍保護劑,，減輕LNP制劑在低溫儲存時的穩(wěn)定性問題。

值得注意的是,，F(xiàn)DA批準的C*V*D-19疫苗Spikevax和Comirnaty使用不同的緩沖液,，這表明不同的mRNA-LNP制劑可能對緩沖體系有不同的要求。（筆者注：Comirnaty上市后制劑處方中緩沖體系由PBS變更為了Tris,，詳細信息請參考：《Moderna：使用TRIS緩沖體系可提高mRNA穩(wěn)定性》）

因此,，為LNP制劑篩選適宜的緩沖體系是一個ji具價值的研究課題。然而,，緩沖體系對LNP的結(jié)構(gòu)形態(tài),、包封率和轉(zhuǎn)染效率方面的作用迄今尚未得到充分研究。

分享的研究中,，使用常用陽離子脂質(zhì)DLin-MC3-DMA制備mRNA-LNP,，在-20℃低溫冷凍3周，比較了LNP凍存前后的理化性質(zhì)和生物學活性（體外+體內(nèi)）,。

結(jié)果表明,，通過體外和體內(nèi)轉(zhuǎn)染衡量，在HEPES和Tris體系中的LNPs總體上優(yōu)于PBS,。與PBS相比，HEPES和Tris作為冷凍保護劑,，可以在更大程度上保存LNPs的結(jié)構(gòu)和mRNA的遞送效率,。

此外，儲存在HEPES中的LNPs在FT循環(huán)后形成了du特的沙漏狀結(jié)構(gòu),，而Tris和PBS在凍融后都產(chǎn)生了高度聚集的結(jié)構(gòu),。因此，HEPES可以為LNPs提供更好的保護,，防止pH梯度急劇下降,，防止LNP聚集,，最終控制相分離過程。另一方面,，使用Tris對轉(zhuǎn)染特別有益,，這表明緩沖鹽等輔料在LNP制劑中的作用可能被大大低估了。

通過分享該研究,，艾偉拓產(chǎn)品團隊希望揭示LNP制劑處方研發(fā)過程中,，緩沖體系選擇的重要性，希望能夠為廣大核酸遞送企業(yè)及相關(guān)從業(yè)者帶來一定的參考,。

未來,，艾偉拓產(chǎn)品團隊也會持續(xù)關(guān)注核酸遞送制劑處方相關(guān)研究進展，包括不同劑型（如凍干劑型）,、不同存儲條件（如2~8℃冷藏存儲）,、不同LNP脂質(zhì)組分及不同載荷等因素對LNP制劑輔料選擇的影響。

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