高效液相色譜柱是高效液相色譜的心臟,，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性,，延長(zhǎng)柱子的使用壽命非常重要,。色譜柱使用時(shí)間后就會(huì)出現(xiàn)柱壓升高、柱效降低,、峰形畸變和分離度降低,、保留時(shí)間改變等變化，如不采取措施,，將會(huì)縮短色譜柱的使用壽命,，影響工作效率，并造成一定的經(jīng)濟(jì)損失,。因此,，有必要加強(qiáng)和規(guī)范色譜柱的管理，從而延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,。本文從影響色譜柱使用壽命的幾個(gè)因素出發(fā),，從管理的角度，探討色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng),。
影響高效液相色譜柱使用壽命的因素
1.流動(dòng)相
在以水溶液為流動(dòng)相時(shí),，水溶液中的微生物例如細(xì)菌容易生長(zhǎng)，當(dāng)用水溶液或有機(jī)酸緩沖液保護(hù)柱子時(shí),，一些霉菌可能在色譜柱中滋生,，堵塞固定相顆粒間的空隙。由于濕法填充技術(shù)的問(wèn)世,，目前普遍使用的色譜柱填料直徑一般都小于10um,，流動(dòng)相中的顆粒雜質(zhì)很容易先沉積在柱頭然后慢慢堵塞柱子。流動(dòng)相的pH值對(duì)色譜柱也有影響,，特別是對(duì)化學(xué)鍵合硅膠填料,，水溶液的pH最適范圍在2~7.5之間，當(dāng)pH>8時(shí),，硅膠會(huì)釋出生成絮狀物堵塞柱子,，且難以復(fù)原，柱效很快降低,，甚至*失效,。當(dāng)在緩沖液中加入有機(jī)溶劑例如甲醇或乙腈時(shí)，鹽類的溶解度下降,，會(huì)析出鹽沉淀,，堵塞柱子。同時(shí)流動(dòng)相中的有機(jī)溶劑和鹽會(huì)腐蝕色譜柱頭的篩板,，產(chǎn)生柱頭凹陷,。流動(dòng)相的極性對(duì)柱子也有一定影響,，對(duì)于硅膠柱，甲醇,、水,、冰乙酸等極性較大物質(zhì)會(huì)破壞填料，反之,，對(duì)于化學(xué)鍵合硅膠,，極性小的物質(zhì)如正丁醇、二氯甲烷等也起同樣的作用,。堿性溶液會(huì)破壞陽(yáng)離子交換樹脂色譜柱,，而酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。
2.樣品和固定相
如果有少量或微量的樣品不能夠溶解在流動(dòng)相中,，在通過(guò)固定相會(huì)堵塞柱子,。樣品中的顆粒雜質(zhì)也會(huì)堵塞柱子。樣品組分例如糖,、蛋白質(zhì)等通過(guò)柱子時(shí)會(huì)產(chǎn)生不可逆吸附,，這樣固定相的活性點(diǎn)被覆蓋。樣品組分還會(huì)與固定相產(chǎn)生反應(yīng),，尤其是對(duì)于氨基柱的影響較為嚴(yán)重,，因?yàn)榘被着c酐、酮形成希夫(Schiff)縮合而減少活性點(diǎn),，使保留時(shí)間縮短,。高效液相色譜柱鍵合相基團(tuán)脫落、固定相分解和活性基團(tuán)變性以及會(huì)影響柱效和保留時(shí)間的顯著改變,。大多數(shù)鍵合相都是通過(guò)硅氧硅鍵(Si-O-Si)連接在硅基質(zhì)上,，形成帶有有機(jī)基團(tuán)的固定相Si-O-Si-R(R為CnH2n+1)，硅氧硅鍵可能在水溶液中水解而斷裂,，使鍵合基團(tuán)脫落,。
會(huì)員.png)
7
立即詢價(jià)
您提交后,，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)